Определение содержания общих липидов жирных кислот, в том числе, нейтральных (НЛ), ГЛИКО (ГЛ) - и фосфо- (ФЛ) - липидов ГЖХ в сухих листьях винограда

АННОТАЦИЯ

В данной статье рассматривается определение содержание общих липидов жирных кислот, нейтральных (НЛ), глико (ГЛ) и фосфо (ФЛ) ГЖХ сухих виноградных листьях.  Общие липиды (ОЛ) из воздушно-сухих листьев двух сортов винограда  извлекают экстракцией смесью хлороформа с метанолом. Основным компонентом группы фосфолипидов был фосфатидилхолины, кроме того обнаружены фосфатидилэтаноламины, фосфатидилинозиты и фосфатидные кислоты. 

Компонентами нейтральных липидов были: углеводороды, триацилглицериды, свободные жирные кислоты, тритерпенолы, стеролы. По данным аналитической ТСХ в составе нейтральных липидов обнаружили α- токоферол. В составе гликолипидов идентифицировают следующие классы: стерилгликозиды и их эфиры, дигалактозилдиацилглицериды и моногалактозилдиацилглицериды.

ABSTRACT

This articIe discusses the determination of the content of total lipids of total lipids of fatty acids, neutral (NL), glyco (GL) and phosphor (FL) GLC dry grape leaves. Total lipids (OL) from the air – dried leaves of two grape varieties are extracted by extraction with a mixture of chloroform and methanol. The main component of the phospholipid group was phosphatidylcholines, in addition, phosphatidylethanolamines, phosphatidylinosites and phosphatidis acids were found. The components of neutral lipids were: hydrocarbons, tricylglycerides, free fatty acids, triterpenols, strols. According to analytical TLC, α – tocopherol was found in neutral lipids. The following ciasses of glycolipids are identified: sterilglycosides and their esters, digalactosyldiacylglycerides and monogalactosyldiacylglycerides.

Ключевые слова: фосфатидилхолины, фосфатидилэтаноламины, фосфатидилинозиты, триацилглицериды, тритерпенолы, стеролы, стерилгликозиды, токоферол, дигалактозилдиацилглицериды и моногалактозилдиацилглицериды.

Keywords: phosphatidylcholins, phosphatidylethanolamines, phosphatidylinosites, triacylglycerides, triterpenols, sterols, steryl glycosides, tocopherrol, digalactosyl diacyl glycerides and monogalactosyl diacyl glycerides.

Введение. Ангур - тадж., uzum - узб., Vitis vinifera L. - это одно из самых распространённых и известных растений. В Центральной Азии известны сотни сортов винограда.

Виноградные корни содержат витамин С, алкалоиды, гликозиды, дубильные вещества. Все части растения содержат в большом количестве соли  Si, Na, P, Fe, Cu, Zn.

Свежие листья винограда имеют богатый физико-химический состав. Богатый химический состав виноградных листьев обуславливает их пищевую и биологическую ценность.

Таблица 1.

Химический состав и содержание пищевых веществ на 100 г съедобной части  консервов "Виноградные листья, сырые"

Результаты и обсуждение: Общие липиды (ОЛ) из воздушно-сухих листьев двух сортов винограда  извлекали экстракцией смесью хлороформа с метанолом (2:1 v/v) по методу Фолча.

 Экстракты промывали 0.05 % водным раствором CaCl₂ для удаления нелипидных компонентов.  После полного извлечения экстракта приемную колбу с экстрактом отсоединяют, и хлороформ отгоняли на роторном испарителе.

Остатки растворителя удаляли высушиванием экстракта в сушильном шкафу при температуре 60 ⁰С до постоянного веса. Выход общих липидов составляет, % от массы воздушно-сухих листьев:

Сушку считали законченной, если разница между двумя последними взвешиваниями составляет 0,002-0,004 г.

Содержание в сухих листьев винограда в % (Х) вычисляли по формуле:

,

где,   Р₁-вес колбы с экстрактом, г,  Р₂ - вес пустой колбы, г,  Р -навеска сухих измельченных  листьев, г.  

Результаты:       №1 – «Мускатный черный»   -         3,7  %  

                          №2 –   «Кизил хурмони» -     3,2 %

Общие липиды были разделены колоночной хроматографией на силикагеле на отдельные группы. При этом  нейтральные липиды элюировали хлороформом, гликолипиды - ацетоном и фосфолипиды - метанолом, содержание их  составляет, соответственно:  №1: 1,2 %, 1,36 % и 0,64 %; №2: 1,8%, 1,55%, 0,35% от массы экстракта.

Компонентами нейтральных липидов были: углеводороды, триацилглицериды, свободные жирные кислоты, тритерпенолы, стеролы. По данным аналитической ТСХ в составе нейтральных липидов обнаружили α- токоферол. В составе гликолипидов идентифицировают следующие классы: стерилгликозиды и их эфиры, дигалактозилдиацилглицериды и моногалактозилдиацилглицериды.

Основным компонентом группы фосфолипидов был фосфатидилхолины, кроме того обнаружены фосфатидилэтаноламины, фосфатидилинозиты и фосфатидные кислоты. 

ТСХ нейтральных липидов проводили в следующих системах растворителей:  гексан  - диэтиловый эфир 1) 4:1; 2) 3:2, для гликолипидов использовали систему растворителей: хлороформ-ацетон-метанол-уксусная кислота-вода 65:20:10:10:3, а для фосфолипидов хлороформ-метанол-амиак 13:5:1 и хлороформ - метанол-уксусная кислота-вода 14:5:1:1.

Нейтральные липиды проявляли парами J₂ и 50 % водным раствором H₂SO₄; гликолипиды- α-нафтолом + 50 % водным раствором H₂SO₄ (опрыскивая последовательно),  фосфолипиды - реагентами Васьковского и Драгендорфа, токоферолы – раствором α, α’- дипиридила.

Для определения состава жирных кислот каждую группу липидов гидролизовали 10% метанольным раствором КОН в соотношении образец: раствор 1:10, при кипячении на водяной бане в течение 1 ч. Полученные мыла разлагали 50% водным раствором H₂SO₄.

Жирные кислоты экстрагировали трижды диэтиловым эфиром. Далее эфирные вытяжки промывали дистиллированной  водой до нейтральной среды, сушили над сульфатом натрия, затем эфир отгоняли. Жирные кислоты метилировали диазометаном.

Очистку полученных метиловых эфиров проводили в тонком слое силикагеля в системе растворителей гексан: диэтиловый эфир 4:1, зону МЭ проявляли в парах J₂ и метиловые эфиры десорбировали с силикагеля хлороформом.

После удаления хлороформа МЭ растворяли в гексане и анализировали на приборе Agilent Technologies 6890 N с пламенно-ионизационным детектором, используя капиллярную колонку длиной 30м с внутренним диаметром 0.32 мм с нанесенной  фазой НР-5 при температуре от 150 до 270 ⁰С. Газ-носитель – гелий. Состав и содержание жирных кислот представлены в таблице 2.3.

Таблица 2.

Состав жирных кислот нейтральных (НЛ), глико (ГЛ)- и фосфо (ФЛ) -липидов ГЖХ, % от массы

Выводы

1. Общие липиды были разделены колоночной хроматографией на силикагеле на отдельные группы. При этом  нейтральные липиды элюировали хлороформом, гликолипиды - ацетоном и фосфолипиды - метанолом, содержание их  составляет, соответственно:  №1: 1,2 %, 1,36 % и 0,64 %; №2: 1,8%, 1,55%, 0,35% от массы экстракта.
2. По данным аналитической ТСХ в составе нейтральных липидов обнаружили α- токоферол.
3. В составе гликолипидов идентифицировали следующие классы: стерилгликозиды и их эфиры, дигалактозилдиацилглицериды и моногалактозилдиацилглицериды.
4. Основным компонентом группы фосфолипидов был фосфатидилхолины, кроме того обнаружены фосфатидилэтаноламины, фосфатидилинозиты и фосфатидные кислоты. 

Список литературы:

1. M. Kates, Techniques of Lipidology: Isolation, analysis and Identification of Lipids, Elsevier, New York (1972). (Все анализы липидов)
2. Кретович, B.Л. Основы биохимии растений / В.Л. Кретович. - Москва. Высшая школа, [1971- с.461 с].
3. Лебедев А.Т. Масс - спектрометрия в органической химии. – М.:БИНОМ. [2003-с 493].
4. Мазнев Н. И. Лекарственные растения. Спра­вочник.-М.: Мартин, [1999.c.167].
5. Torres, J.L. Valorization of grape (Vitis vinifera) byproducts. Antioxidant and biological properties of poly phenolic fractions differing in procyanidin composition and flavonol content (Испания) / J.L. Torres, В. Varela, М.Т. Garcia
6. Zhand W., Wu P., Li C. // Rapid, Commun. Mass. Spectrom. - [2006. - Vol. 20. - P. 1563]
7. Liobera, Antonia. Dietary fibre content and antioxidant activity of Manto Negro red grape (Vitis nivifera): pomace and stem / Antonia Liobera, Jaime Сanellas // Food Chemistry. – [2007. - Vol. 101, № 2. - P. 659-666].