ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АНТИБИОТИКОВ В ПРОБАХ НАИБОЛЕЕ РАСПРОСТРАНЁННЫХ МАРОК МОЛОКА ПРОИЗВЕДЁННЫХ В УЗБЕКИСТАНЕ

АННОТАЦИЯ

В данной статье приведены результаты анализа остаточных количеств антибиотиков в пробах молока. Изучены образцы молока четырёх наиболее распространённых марок молока и определены остаточные количества антибиотиков таких как: цефтиофур, тиамфениколь (левомицетин), стрептомицин, телозин, тетрациклин, хинолоны (бацитрацин) методом иммуноферментного анализа. Приведены результаты анализов и выводы о безопасности для потребителей данных проб молока.

ABSTRACT

This article presents the results of the analysis of residual amounts of antibiotics in milk samples. Milk samples of the four most common milk brands were studied and residual amounts of antibiotics such as ceftiofur, thiamphenicol (levomycetin), streptomycin, telosin, tetracycline, quinolones (bacitracin) were determined by enzyme immunoassay. The results of analyses and conclusions about the safety of these milk samples for consumers are presented.

Ключевые слова: антибиотики, остаточное количество антибиотиков, молоко иммуноферментный анализ.

Keywords: antibiotics, residual amount of antibiotics, milk enzyme immunoassay.

Введение. Антибиотики давно стали неотъемлемой частью сельского хозяйства. Они широко применяются для лечения и профилактики заболеваний воспалительного характера у сельскохозяйственных животных.

Антибактериальные препараты в молоко попадают в основном тремя способами: вместе с кормами, в результате профилактических мер по ветеринарной обработке сельскохозяйственных животных, в частности его вакцинации во избежание возможных заболеваний, а также в результате лечения препаратами, которые содержат в себе антибиотики. Последние исследования показывают, что добавление небольшого количество антибактериальных веществ в корма животных является таким фактором, который влияет на стимулирование роста и предотвращения развития различных заболеваний у молочных коров, кур и т.д. Вышеприведённые данные привели к массовому использованию в животноводстве антибиотиков в качестве действующих стимуляторов роста в сельском хозяйстве. В следствии чего, помимо необходимых терапевтических и еже годных профилактических целей, антибиотики широко использовались в качестве кормовых добавок для увеличения массы животного, а также в качестве консервантов для кормов. Немаловажен тот факт, что после принятия решения в Дании о прекращении добавлений антибактериальных препаратов в корм животных привело к резкому возрастанию количества применяемых антибиотиков в терапевтических целях, то есть для лечения конкретных заболеваний у животных. Несмотря на хорошие и отвечающие всем требованиям условия для молочных коров на ферме, всё равно вопрос необходимости лечения маститов у молочных коров является актуальным, а это подразумевает за собой применение антибиотиков [1-3].

Во время лечения молочной коровы вне зависимости от разновидности заболевания необходимо помещать в карантинное отделение фермерского хозяйства, а также содержать отдельно от всего основного стада. Молоко, полученное от лечащейся молочной коровы, нужно утилизировать и ни в коем случае перерабатывать в течение всего карантинного периода лечения антибактериальными препаратами, а также включая период его выведения из организма данной коровы. На более известных и крупных фермерских хозяйствах все эти вышеприведённые требования строго соблюдаются, но, к сожалению, на более мелких фермах происходят частые нарушения данных требований.

Многие владельцы животных ферм и ветеринары доверяют нормативным данным выведения из организма молочной коровы антибактериальных препаратов, которые указываются в инструкции к данному препарату. Этот срок может составлять 5-10, а иногда даже 20 и более дней, и он зависит от разновидности, дозировки, а также продолжительности лечения коровы. Иногда встречаются недобросовестные производители, которые указывают сроки выведения антибиотиков с ошибками. Помимо этого, не стоит забывать и об индивидуальности организма каждой молочной коровы и вероятность того, что он может по-разному реагировать на применение антибактериального препарата: у одной молочной коровы он выводится из организма намного быстрее, у другой - намного дольше. Несвоевременный, то есть поздний перевод молочной коровы к основному стаду в фермерском хозяйстве ведет к дополнительным издержкам для фермеров и недополучению прибыли. А наоборот преждевременный вывод молочной коровы из карантинной зоны влечет за собой риск попадания остаточных количеств антибиотиков в молоко, которое сдаётся на молоко перерабатываемый завод, в результате чего, высок риск вероятности браковки молока на приёмке у завода. Вышеприведённые риски возрастают в несколько раз особенно в сезон «низкого молока», а именно, когда большие молоко перерабатываемый заводы для загрузки всех мощностей расширяют свою сырьевую зону, путём включения в нее широкого ряда поставщиков, тем самым у поставщиков увеличивается соблазн увеличить свой доход, сдав максимально большое количество молока, в данной ситуации они могут довить в общий объём молока из фермы молоко от карантинных коров [1-5].

Согласно данным приведённым Государственного комитета Республики Узбекистан, статистика поголовья коров в Республике на 1 января 2023 года составляет 4,9 млн голов, это показывает увеличение 99,6 тысяч  голов по сравнению с 2021 годом. Распределение их выглядит таким образом: 4,5 млн голов содержатся в дехканских хозяйствах, а 367 тысяч голов содержатся в фермерских хозяйствах, остальные 82 тысяч голов - в сельхозпредприятиях. Образцы молока отбирали из местных магазинов продуктов питания.

В процессе выбора марки молока и компании производителя учитывали наиболее распространённость данной марки молока на рынке Узбекистана.

Рисунок 1. Образцы четырёх марок молока, выбранные для проведения анализа

Материалы и метод исследования. В целях проведения анализа использовали анализатор серии Evidence, в котором для иммуноферментного анализа применяется технология матричных био-чипов и они сочетают в себе новейшие технологические достижения в части обнаружения остаточного содержания фармацевтических препаратов с применением принципов иммуноферментного анализа образцов. Это привело к созданию двух систем, которые позволяют одновременно проводить количественный или качественный анализ остаточных количеств препаратов в испытуемых образцах.

Evidence Investigator - является мультианалитическим полуколичественный анализатором, для определения остатков лекарственных средств и токсинов. Применяя технологию массива биочипов, исследователь фактических данных обеспечивает точность и эффективность скрининга продуктов питания на наличие остатков лекарств, предлагая лабораториям результаты, сопоставимые с результатами LC-MS/MS-MS и другими подтверждающими методами. У данной системы существуют различные матрицы скрининга пищевых продуктов, включая мясо, морепродукты, молоко, мёд, корма, злаки [2].

Проведение исследования. 10 см³ испытуемого молока поместили в пробирку из полипропилена, вместимостью 15 см³ затем центрифугировали в течении 10 мин при 4000 об/мин. Удалили отделившуюся верхнию жировую прослойку, образовавшегося на поверхности испытуемого молока после центрифугирования. Затем отобрали 0.5 см³ уже обезжиренного молока в микро центрифужную пробирку, добавили 0.5 см³ рабочего раствора буфера. Для перемешивания использовали шейкер вортексного типа, длительность перемешивания 1 мин, затем использовали для проведения анализа. Данный этап проводили для каждого из четырёх образцов молока.

Подготовка тест-системы к проведению анализа. Перед использованием тест-систему вынули из холодильника и держали при температуре (25±2) ^о С не менее 30 мин, после чего аккуратно встряхивая перемешали каждый флакон. В процессе анализа для каждого реактива и раствора использовали отдельные съёмные наконечники пипеток переменной вместимости. Вносили растворы на биочипы осторожно, стараясь не касаться наконечниками поверхности. На всех стадиях работы избегали воздействия прямого солнечного света, так как растворы реактивов чувствительны к солнечному свету. После использования реагенты тест-системы сразу убирали в холодильник [3-4].

Проведение анализа: В держатель вставили необходимое количество кассет с биочипами. На биочип нанесли рабочий буфер из тест-системы в количестве 0,20 см³, добавили градуировочные растворы в количестве 0,05 см³ и заранее подготовленные пробы молока. Затем растворы в биочипах перемешивали аккуратным постукиванием по ребру рамки держателя биочипов. Далее перемешивали в термошейкере при 370 об/мин и температуре 25 ^о С в течение 30 мин. Добавили 0,05 см³ рабочего раствора тест-системы и перемешивали в термошейкере 370 об/мин и температуре 25^о С в течение 60 мин. Содержимое сливали, затем каждый биочип двухкратно промывали, добавляя по 300 мм³ рабочего раствора буфера в каждый биочип, выдерживали 2 мин затем удалили раствор. Процедуру повторили 4 раза. После последнего промывания в каждый биочип вносили по 300 мм³ рабочего раствора и оставили до добавления раствора субстрата в тёмном месте при температуре (25±2) ^о С [5].

Кассету с девятью биочипами удалили из держателя. Слили рабочий раствор буфера и аккуратно стряхивали его остатки на фильтровальную бумагу. Затем вносили в каждый биочип по 0,25 см³ рабочего раствора субстрата. Инкубировали в темноте при температуре (25±2) ^оС в течение 2 мин. Затем измеряли интенсивность люминесценции биочипов с помощью иммунохимического анализатора. Результаты обнаружения антибиотиков в образцах приведены в таблице 1.

 Таблица 1.

Результаты обнаружения антибиотиков с применением тест-систем на основе иммуномикрочиповой технологии Anti Microbial Array II plus в молоке

Выводы. По результатам проведённого анализа проб молока из четырёх производителей можем прийти к следующему выводу, что в образце молока под номером один выявлены остаточных количеств антибиотиков таких как группа тиамфиниколь, стрептомицин, телозин, в образце под номером два определены остаточные количества антибиотиков группы стрептомицин и тетрациклин, в образце под номером три выявлены остаточные количества антибиотиков таких групп как тиамфиниколь, стрептомицин, телозин и хинолоны, в образце под номером четыре тиамфиниколь, стрептомицин, телозин, тетрациклин и хинолоны. Эти данные показывают важность контроля за применяемыми антибиотиками на фермерских хозяйствах, а также за индивидуальными карантинными сроками поле применения данных лекарственных средств.

Список литературы:

1. Контроль антибиотиков в молоке: оптимальное решение для фермерских хозяйств- https://atl-ltd.ru/ (дата обращения 20.05.2023  г.)
2. Чаплыгина О. С., Просеков А. Ю., Веснина А. Д. Методы оценки остаточного количества антибиотиков группы амфениколы в молоке и молочной продукции // Техника и технология пищевых производств. 2022. Т. 52. № 1. С. 79–88.
3. Bacanlı M, Basaran N. Importance of antibiotic residues in animal food. Food and Chemical Toxicology. 2019;125:462–466. https://doi.org/10.1016/j.fct.2019.01.033
4. Абдусаломова Д, Азизов О.Т. Иммуноферментный анализ проб молока из местных молочных ферм для определения остаточных количеств антибиотиков.// “WOMEN IN STEM” сборник трудов межд. конф. Ташкент, 2023, 218-219 ст.
5. Абдусаломова Д, Азизов О.Т. Антибиотики в молоке: в чём их опасность и способы их обнаружения // “Problems and prospects of innovative machinery and technologies in the agri-food chain” international scientific and practical conference. Ташкент, 2023, 98 ст.
6. https://www.randoxfood.com/ (дата обращения 20.05.2023 г.)
7. ГОСТ 34285-2017-продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод обнаружения химиотерапевтических лекарственных средств для ветеринарного применения с помощью иммуноферментного анализа с хемилюминесцентной детекцией с использованием технологии биочипов.
8. ГОСТ 32219-2013 Молоко и молочные продукты Иммунологические методы определения наличия антибиотиков. c.19.
9. ©DairyNews.todayhttps://dairynews.today/news/uzbekistan-molochnyy-rynok.html (дата обращения 30.05.2023 г.)