ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ В ЭКСТРАКТЕ ЛИСТЬЕВ РЕДЬКИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (ВЭЖХ)

АННОТАЦИЯ

В медицине многие лекарственные растения имеют бесценное значение благодаря своим лечебным свойствам, и редька (Brassica rapa) несомненно не является исключением из-за своих замечательных целебных качеств. Известно, что лекарственные растения содержат множество витаминов и минералов, и листья редьки также обладают богатым химическим составом. Листья редьки содержат витамины, минералы, макро- и микроэлементы, антиоксиданты, а также множество органических веществ. В данной статье рассматривается определение количества водорастворимых витаминов в экстракте листьев редьки методом ВЭЖХ.

ABSTRACT

Many medicinal plants are invaluable due in medicine to their healing properties, and radish (Brassica rapa) is undoubtedly not an exception because of its remarkable medicinal benefits. It is well known that medicinal plants contain a wide range of vitamins and minerals, and radish leaves also have a rich chemical composition. Radish leaves contain vitamins, minerals, macro and microelements, antioxidants, and many organic substances. This article discusses the determination of the amount of water-soluble vitamins in radish leaf extract using the HPLC method.

Ключевые слова: Экстракт редьки (Brassica rapa), метод ВЭЖХ, витамины B₁, B₂, B₃, B₆, PP, ацетонитрил, уксусная кислота, гидроксид натрия.

Keywords: Radish (Brassica rapa) extract, HPLC method, vitamins B₁, B₂, B₃, B₆, PP, acetonitrile, acetic acid, sodium hydroxide.

Введение. Среди целебных растений редька занимает особое место. Уже много лет это растение привлекает внимание людей благодаря своему отличному вкусу и лечебным свойствам. Полезны не только корнеплоды редьки, но и её зелёные листья. Листья содержат множество витаминов. В частности, в листьях редьки присутствуют значительные количества кальция, меди, железа, магния, марганца, селена и цинка. Из витаминов в них содержатся витамины C, B₁, B₂, B₃, B₆, PP. Регулярное потребление этого овоща эффективно предотвращает остеопороз, артрит, анемию и сердечно-сосудистые заболевания [1, с. 272]. Целью данного эксперимента является определение содержания водорастворимых витаминов в экстракте листьев редьки, а также анализ их эффективности для человеческого организма.

Определение количества водорастворимых витаминов в экстракте с использованием метода ВЭЖХ

Часть эксперимента. Используемые реагенты и оборудование. Витамин B₁₂ (производитель Rhydburg Pharmaceuticals, Германия), витамин C (производитель Carl Roth GmbH, Германия), витамин B₉ (производитель DSM Nutritional Products GmbH, Германия), витамины B₁, B₂, B₃, B₆ и PP (производитель BLDPharm, Китай) были использованы в качестве стандартных веществ. Для работы использовались химически чистые реагенты — вода, ацетонитрил, уксусная кислота и гидроксид натрия (высокочистая марка). Анализ содержания водорастворимых витаминов в растительном экстракте был выполнен на высокоэффективной жидкостной хроматографической системе LC-40 Nexera Lite, произведенной японской компанией Shimadzu.

Приготовление стандартных растворов. Растворы витаминов C (CAS 50-81-7), B₁ (CAS 59-43-8), B₆ (CAS 58-56-0), B₃ (CAS 59-67-6), B₁₂ (CAS 68-19-9) и PP (CAS 98-92-0) были приготовлены путем растворения 5 мг каждого витамина в 50 мл 0,1 Н раствора HCl, что обеспечило концентрацию 100 мг/л для каждого витамина. Стандартные растворы витаминов B₂ (CAS 83-88-5) и B₉ (CAS 59-30-3) были приготовлены путем растворения 5 мг каждого витамина в 50 мл 0,025% раствора гидроксида натрия. Затем, 200 мкл каждого из витаминов B₁, B₆, B₃, B₁₂, PP было отобрано и смешано для подготовки раствора с концентрацией 14,286 мг/л для каждого витамина. Таким образом, были приготовлены стандартные растворы с концентрациями 7,143 мг/л, 3,571 мг/л и 1,786 мг/л. Для витамина C были подготовлены стандартные растворы с концентрациями 286 мг/л, 143 мг/л, 71,5 мг/л и 57,2 мг/л. Для построения калибровочной кривой использовалась чистая вода для концентрации 0 мг/л.

Приготовление образца экстракта. Для экстракции водорастворимых витаминов из образца, 1 грамм проверяемого материала был отмерен и помещен в конусообразную колбу объемом 50 мл. К полученному образцу добавили 25 мл 0,1 N раствора HCl. Смесь была подвергнута экстракции в ультразвуковой ванне GT SONIC-D3 (производство Китай) при температуре 60°C в течение 20 минут. Затем смесь была охлаждена, отфильтрована, и объем был доведен до 25 мл с помощью воды в мерной колбе. Из экстракта было отобрано 1,5 мл, которое фильтровали через шприцевой фильтр с пористостью 0,22 мкм и поместили в пробирку для анализа [2, с. 48].

Хроматографические условия. Определение витаминов.

Для анализа стандартных растворов и образца экстракта использовалась высокоэффективная жидкостная хроматография LC-40 Nexera Lite с насосом LC-40D, автосамплером SIL-40, фото-диодным матричным детектором SPD-M40 (PDA) и программным обеспечением LabSolutions версии 6.92. Для хроматографирования использовалась колоночная система Shim pack GIST C18 (150 × 4,6 мм, 5 мкм, Shimadzu, Япония) с обратной фазой, а также градиентная подвижная фаза, состоящая из ацетонитрила (A) и 0,25% водного раствора уксусной кислоты (B) (см. 1-й таблицу). Размер инъекции составил 10 мкл, скорость потока — 0,6 мл/мин, а температура термостата колонки была установлена на 40 °C.

Аналитический сигнал для каждого витамина (площадь пика) регистрировался на трех длинах волн: 265, 291 и 550 нм (см. рисунки 1-3). Для определения витамина C использовался градиентный метод на 15 минут (см. 2-й таблицу), а аналитический сигнал был измерен на длине волны 265 нм.

Таблица 1.

Градиентная программа подвижной фазы для определения витаминов

Таблица 2.

 Градиентная программа подвижной фазы для определения витамина C

Рисунок. Хроматограмма стандартного раствора витаминов

Рисунок 2. Хроматограмма стандартного раствора витаминa C

Обсуждение полученных результатов. Определение витаминов в экстракте образца. Хроматограмма экстракта образца (рисунки 3 и 4) была получена, и на основе полученных данных количество витаминов в 100 г плода было вычислено с использованием следующей формулы, результаты представлены в таблице 3.

X – количество витаминов в 100 граммах плода, мг;

C_вит – концентрация витамина в экстракте, определенная методом ВЭЖХ, мг/л;  V_экстр– объем экстракта, л;  m_обр – масса образца, взятая для подготовки экстракта.

Рисунок. Хроматограмма определения витаминов в экстракте образца

Рисунок 4. Хроматограмма определения содержания витамина C в экстракте образца

Таблица 3.

Количество витаминов и время удерживания в экстракте

Из полученных результатов видно, что листья редьки содержат большое количество витаминов, что было подтверждено в ходе эксперимента. В частности, в экстракте были обнаружены значительные количества витаминов B₂, B₃, B₉, C, что подтверждает их эффективность в профилактике и лечении многих заболеваний, связанных с дефицитом витаминов в организме человека.

Выводы. Витамин B₂, обнаруженный в ходе эксперимента, необходим для поддержания здоровья кожи, глаз и нервной системы. Витамин B₃ также способствует поддержанию здоровья кожи, нервной системы и пищеварительной системы. Он играет важную роль для нормального функционирования нервной системы. Витамин B₉ имеет одно из самых важных преимуществ — его роль в производстве красных кровяных клеток. Он поддерживает транспортировку кислорода по организму, повышает общий уровень энергии и уменьшает усталость [3, с. 53-58]. Витамин C укрепляет иммунную систему организма и борется с инфекциями. Также он помогает сократить продолжительность и распространение инфекционных и вирусных заболеваний. Таким образом, экстракт этого растения удовлетворяет потребности организма в витаминах и является удобным средством для профилактики многих заболеваний. Результаты показывают, что состав экстракта, богатый витаминами, ярко проявился в проведенных экспериментах.

Список литературы:

1. Непокойчицкий Г. "Лечение растениями. Энциклопедический справочник", издательство АНС, 2007 - с.272.
2. Raxmatullayevna X. G. “Dorivor o‘simliklardan ajratib olingan oddiy ekstraktlarning shifobaxsh xususiyatlari haqida” – 2023. – Т. 15. – №. С. 44-48.
3. Karimovna M. F. et al. VITAMINLAR //Научный Фокус. – 2023. – Т.  №. С. 53-58.
4. Siemens D.H. et al. Cost of defenсe in the context of plant competition: Brassica rapa may grow and defend //Ecology. – 2002. – Т. 83. – №. 2. – С. 505-517.
5. Энциклопедия лекарственных растений / Электронный ресурс – режим доступа – www.lektrava.uz
6. Энциклопедия растений / Электронный ресурс – режим доступа – www.greeninfo.ru
7.  Портал здоровья и народной медицины растений / Электронный ресурс – режим доступа – www.u-lekar.ru