Изучение аминокислотного и витаминного состава растения Elaeagnus angustifolia L.

АННОТАЦИЯ

Приведены данные по изучению аминокислотного и витаминного состава растения Elaeagnus angustifolia L. Изучением аминокислотного состава показано, что среди исследованных аминокислот основными являются глицин, аспарагин, пролин, цистеин и тирозин.

При изучении содержания водорастворимых витаминов в джида было показано, что он содержит большее количество витаминов В₆ (68,78мг/%) и В₉ (232,3 мг/%).

ABSTRACT

The data on the study of the amino acid and vitamin composition of the plant Elaeagnus angustifolia L. are presented. The study of the amino acid composition shows that among the studied amino acids, the main ones are glycine, asparagine, proline, cysteine and tyrosine.

When studying the content of water-soluble vitamins in jiida, it was shown that it contains more vitamins B₆ (68,78 mg/%) and B₉ (232,3 mg/%).

Ключевые слова: Elaeagnus angustifolia L., глицин, аспарагин, пролин, методика Эдмана, ВЭЖХ, В₆, В₉.

Keywords: Elaeagnus angustifolia L.,glycine, asparagine, proline, Edman method, HELC method, B₆, B₉.

Введение

На территории Узбекистана произрастает около 40 видов растений рода Elaeagnus angustifolia L. [1].

Приводятся сведения по установлению физиологической, биологической и фармакологической активности различных представителей рода Elaeagnus angustifolia L. Показано, что экстракты растений рода Elaeagnus обладают антимикробным, инсектицидным, противовирусным, антиоксидантным, ранозаживляющим, противовоспалительным, антимутагенным, противоопухолевым и другими эффектами [2].

Растения рода Elaeagnus содержат различные классы биологически активных веществ, и все виды отличаются друг от друга по качественному и количественному составу биологически активных веществ, содержащихся в них. В связи с этим нами проведено изучение аминокислотного и витаминного состава растения Elaeagnus angustifolia L. [3-5].

Средства, полученные на основе сырья различных видов растений рода Elaeagnus применяются при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, верхних дыхательных путей, мочевыделительной и сердечно-сосудистой систем и используются как общеукрепляющие. Описан химический состав экстрактов большинства представителей рода Elaeagnus, содержащие различные биологически активные составляющие, среди которых заменимые и незаменимые аминокислоты и витамины.

Приведенные выше сведения актуализируют дальнейшее более детализированное исследование биологических активностей растений рода Elaeagnus, произрастающих на территории Узбекистана с целью расширения арсенала отечественных фитопрепаратов.

Исходя из выше изложенных, целью данного исследования является изучение заменимых и незаменимых аминокислот и витаминов растения Elaeagnus angustifolia L., произрастающего в различных климатических условиях Республики Узбекистан.

Экспериментальная часть

Объектом исследования выбраны вегетативные органы растения Elaeagnus angustifolia L., произрастающие на территории Республики Узбекистан.

Имеются данные по определению содержания аминокислот с помощью секвенатора по методике Эдмана и хроматографии в тонком слое сорбента, а также с помощью аминокислотного анализатора ААА 339 М (Чехия) [6-9].

Нами для анализа аминокислот использован по 1 г плодов лоха, гидролизованного при 110˚С 24 часа без доступа воздуха 5 мл 5,7N HCl. Гидролизат упаривают, сухой остаток растворяют в смеси триэтиламин-ацетонитрил-вода (1:7:1) и высушивают. Эту операцию повторяют дважды для нейтрализации кислот. Реакцией с фенилтиоизоцианатом получают фенилтиокарбамил-производные (ФТК) аминокислот по методу [10].

Идентификация производных аминокислот проводилась методом ВЭЖХ. Условия проведения хроматографии:

хроматограф Agilent technologies 1200 C DAD детектором,

колонка75х4,6 мм Discovery HS С₁₈, 3 μm.

Раствор А: 0,14 М CH₃COONa+0,05% ТЭА рН-6,4; В: ацетонитрил.

Скорость потока 1,2 мл/мин,

Детекция -269 нм.

Качественный анализ и количественный расчет концентрации исследуемых аминокислот проводился сравнением времени удерживания и площадей пиков стандартных и исследуемых образцов с ФТК- производных аминокислот. Полученные данные приведены в таблице 1.

Для исследования водорастворимых витаминов использовалась вегетативные органы Elaeagnus angustifolia. Анализы были проведены с использованием метода ВЭЖХ с детектором на диодной матрице (ДАД).

Условия проведения хроматографирования:

Хроматограф - Agilent 1200 Infinity с автодозатором (USA)

подвижная фаза (градиентный режим) – ацетонитрил – буферный раствор pH=2.92 (4% : 96%) 0-6 мин.,  (10% : 90%) 6-9 мин., (20% : 80%) 9-15 мин., (4% : 96%) 15-20 мин.

объем инжекции – 20 мкл.

скорость подвижной фазы – 1,000 мл/мин.

колонка – Eclipse XDB – C18.

детектор – диодно-матричный, длины волны 272нм, 292нм, 254нм, 297нм и 360 нм.

Рекомендуемые концентрации витаминов в стандартном и испытуемом растворах:

Витамин В₁ – от 5 до 15 мкг/мл;

                В₂ – от 3 до 8 мкг/мл;

                В₃ – от 2 до 5 мкг/мл;

                В_с – от 3 до 8 мкг/мл;

                В₆ – от 5 до 10 мкг/мл;

                С – от 150 до 300 мкг/мл;

                Рутин – от 100 до 200 мкг/мл;

Приготовление подвижной фазы.

Раствор А. Около 0,240 г (точная навеска) натрия пентансульфоната и 5 мл уксусной кислоты ледяной растворяют в смеси метанол-вода (25:75), переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.

Раствор Б. Около 0,275 г (точная навеска) натрия гептансульфоната и 5 мл уксусной кислоты ледяной растворяют в смеси метанол-вода (25:75), переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.

Для получения подвижной фазы смешивают растворы А и Б в соотношении 5:3.

Приготовление стандартного раствора. Точные навески 0,1г стандартных образцов витаминов В₁, В₂, В₆, никотинамида, В_С (фолиевой кислоты), С, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл подвижной фазы, нагревают в течение 20 мин на водяной бане при 60˚С, охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора подвижной фазой до метки и перемешивают (РСО). Концентрация РСО образца 1мг/мл.

Проведение анализа. Последовательно хроматографируют предварительно отфильтрованные через фильтр с размером пор 0,5 мкм сначала раствор РСО и растворы испытуемых образцов по 3 раза каждую. Для расчетов используется среднее значение их трех параллельных определений [11].

Результаты и обсуждение

В результате изучения аминокислотного состава растения Elaeagnus angustifolia, показано, что в плодах растения содержатся 19 аминокислот.

Полученные данные по содержанию аминокислоты представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Содержание свободных аминокислот в плодах растения Elaeagnus angustifolia

Из данных приведенных в таблице 1 видно, что плоды растения Elaeagnus angustifolia L., содержат 19 аминокислот. Содержание свободных аминокислот составляет в среднем 0,90 мг/1000мг. Среди изученных аминокислот наибольшее содержание отмечено у пролина (2,26 мг/1000мг), цистеина (1,53 мг/1000мг) и аспарагина (1,098 мг/1000мг). Другие аминокислоты находятся в наименьшей концентрации от 0,04 до 0,5 мг/г. В образцах №1 и №2 наблюдалось отсутствие метионина и гидрохлорида лизина. Также в образцах №3 и №4 наблюдается отсутствие метионина. Как видно гистидин отсутствует во всех исследованных образцах.

Витамины в сырье представлены аскорбиновой кислотой (витамин С), а также витаминами В₆, В₁, В_С и В₂. Изучением водорастворимых витаминов 16 видов лоха выявлено, что значительным большим содержанием встречается фолиевая кислота. Ее содержание достигает до 2,323 мг/г. Количественное содержание водорастворимых витаминов было определено относительно площадей пиков стандартных образцов. Хроматограмма стандартных образцов витаминов приведена в рисунке 1.

Рисунок 1. Хроматограмма стандартных образцов витаминов

Анализы были проведены по методике [12].

Результаты проведенных нами исследований обобщены в табл. 2

Таблица 2.

Содержание водорастворимых витаминов в плодах растения Elaeagnus angustifolia