ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КВЕРЦЕТИНА МАСЛЯНОМ ЭКСТРАКТЕ ПЛОДОВ МОЖЖЕВЕЛЬНИКА Juniperus Communis L. МЕТОДОМ ВЭЖХ

АННОТАЦИЯ

Получены и охарактеризованы масляные экстракты можжевельника Juniperus Communis L. в подсолнечном и хлопковом масле. Результаты ВЭЖХ анализа показали наличие в масляных экстрактах кверцетина. Наибольшее содержание кверецетина наблюдается в масляных экстрактах на основе хлопкового масла. Масляные экстракты можжевельника представляют интерес для получения косметических средств наружного применения.

ABSTRACT

Oil extracts of Juniperus Communis L. with sunflower oil and cottonseed oil were obtained and characterized. The results of HPLC analysis showed the presence of quercetin in the oil extracts. The highest content of quercetin is observed in oil extracts based on cottonseed oil. Oil extracts of juniper are of interest for obtaining cosmetics for external use.

Ключевые слова: масленный экстракт плоды Juniperus Communis L., ВЭЖХ, кверцетин.

Keywords: Oil extract of fruits Juniperus Communis L., HPLC, quercetin.

Введение. Наиболее подробно изучен химический состав эфирного масла ягод можжевельника (Juniperus communis L.), в котором идентифицировано более 70 соединений (более 96 % летучих веществ). В качестве основных компонентов обнаружены монотерпеновые углеводороды α-пинен (51,4 %), мирцен (8,3 %), сабинен (5,8 %), лимонен (5,1 %) и β-пинен (5,0 %) и другие. Эфирные масла содержат моно-(80,45) и сесквитерпеновые углеводроды (9,6 %), а также кислородсодержащие соединения в качестве остального состава [8]. Из-за наличия эфирных масел данные соединения предотвращают образование радикалов и защищают от перекисного окисления липидов. Используя различные растворители (ацетон, водный этанол), раствор f NaOH и воду проведена экстракция можжевельника Берри и определено содержание полифенолов с помощью ультрафиолетовой спектрофотометрии. Выявлено наличие 67 соединений в составе можжевельника Берри. Содержание монотерпена в разных фракциях достигает до 80,87 %, α-пинена 39,12%, β-пинена 12,68% и мирцена 12,92% [6].

Определено содержание флавоноидного состава метанольных экстрактов ягод Juniperus communis L. выращенного в Турции. Показано количество полифенолов 59,17±1,65 мг САЕ/г экстракта. К основным соединениям относятся гиполаэтин-7-пентозид и кверцетин-гексозид. Экстракты проявили активность против гамаположительных микробов [11].

Можжевельник содержит эфирные масла, сахар, органические кислоты (муравьиная, уксусная, яблочная и др.). полифенолы, минеральные смолы, воски и др. Из плодов, хвои, ветвей, отгоняя с водяным паром, получают эфирные масла. Экстракты можжевельника обладают дезинфицирующим, противовоспалительным и болеутоляющим действием. Масляные экстракты можжевельника назначают наружно, на его основе изготовлены кремы, эмульсии и ряд косметических препаратов [3; 4]. Очень эффективны кремы на основе можжевельника как тонизирующие, питательные и очищающие. Средства на основе можжевельника применяют для улучшения структуры волос и повышения блеска [4].

Цель исследования. Цель данной работы получение и исследование масляного экстракта можжевельника, а также определение содержания кверцетина в составе масляного экстракта.

Экспериментальная часть. В качестве растительного сырья использовали плоды Juniperus Communis L. (Узбекистан, Ташкентская область), а в качестве экстрагента использовали растительные масла (хлопковый и подсолнечный).

Биологически активные вещества извлекали из растений путем мацерации в масленом экстракте.

Для этого в емкости помещали по 10 г мелко нарезанных плодов, заливали 100 мл масла и ставили на паровую баню на 60 мин. Полученную вытяжку остужали до комнатной температуры, доводили до начального объема, оставили на 24 часа и фильтровали.

Состав флавоноидов в масляном экстракте определили, используя метод ВЭЖХ. Разделение проводится на колонке размером 4,6´150 мм заполненной, сорбентом Zorbax Eclipse C-18 с величиной частиц 5 мкм. Подвижная фаза: 0,3 % фосфорной кислоты (А) и метанол (Б) градиентом режимов. Детектирование проводится при длинах волны 370 нм, которые являются характерной чертой кверцетина, соответственно. Скорость потока элюента составляет 1 мл/мин, объем вводимой пробы – 10 мкл. Температура хроматографирования – 35 ⁰С. Продолжительность анализа составляет 30 мин. Время удерживания кверцетина (12,28 мин).

Результаты и обсуждения. С начала для масляного экстракта можжевельника определили основные качественные показатели. Основные качественные показатели масляного экстракта в подсолнечном и хлопковом масле приведены в таблице 1 и 2.

Таблица 1.

Основные качественные показатели масляного экстракта можжевельника (хлопковое масло)

Таблица 2.

Основные качественные показатели масляного экстракта можжевельника (подсолнечное масло)

Для подтверждения наличия фенольных соединений проводили реакции с 3 % раствором хлорида железа (III), и наличие терпеноидов установлено по реакции с 2 % раствором ванилина в 85 % серной кислоте.

Как показывают результаты ВЭЖХ в составе масляного экстракта Juniperus Сommunis L., обнаружены флавоноиды. Для начала были сняты хроматограммы стандарта кверцетина (рис.1) для дальнейшего определения его в масляном экстракте. Для стандартного кверцетина характерно следующее время выдержки – 12.122 мин при длине волны равное УФ спектра 370 нм.

Таблица 3.

Градиентом режимов

Рисунок 1. Хроматограмма стандарта кверцетина. Время удерживания (мин)- 3.0±5.0 минут

Для установления кверцетина в составе масляного экстракта данное вещество подвергали извлечению с этанолом. Для этого масляный экстракт в количестве 100 г обрабатывали 300 мл 96 % этанолом трехкратно, этанольный слой отделяли, суммировали и, перегоняя спирт, раствор довели до объема 100 мл. Из этого раствора определяли содержание кверцетина.

Параллельно из обезжиренного и измельченного плода провели экстракцию с 96 %-ным спиртом. Результаты определения содержания кверцетина из этанола представлены на рисунке 2. При экстракции со спиртом время выдержки кверцетина составляет 12.109 мин. При спиртовой экстракции выделяется 0,0644 % кверцетина. Результаты, полученные при воздействии на масляный экстракт подсолнечным маслом, указывают о наличии кверцетина в экстракте (рис. 3) в количестве 0,0146 %. Время выдержки в данном экстракте составляет 11.525 мин. Масляный экстракт можжевельника в хлопковом масле показывает наличие в образце 0,110 % кверцетина. При этом время выдержки кверцетина равно 10,749 мин.

Рисунок 2. Хроматограмма маслянный экстракт можжевельника в хлопковом масле

Рисунок 3. Хроматограмма маслянный экстракт можжевельника в подсолнечным масле

Рисунок 4. Хроматограмма спиртовый экстракт можжевельника

В соответствии с результатами анализа, содержание кверцетина в образцах экстракта Juniperus Сommunis L. составляет: спиртовой экстракт – 0,0644 %, масляный экстракт (хлопкого) – 0,11 %, в составе масляного экстракта (подсолнечного) – 0,0146 %.

Обобщенные результаты хроматографического анализа представлены в таблице 3.

Таблица 4.

Заключение. Получен и охариктеризовани масляный экстракт можжевельника Juniperus Communis L. в подсолнечном и хлопковом масле. Анализ масляных экстрактов показывает наличие кверцетина. Наибольшее содержание кверцетина наблюдается в масляных экстрактах хлопкового масла. Масляные экстракты представляют собой практический интерес для получения косметических средств.

Список литературы:

1. Государственная фармакопея СССР. – Вып 2. – Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырьё. МЗ СССР. – 11-е изд. доп. – М: Медицина, 1991. – 397 с.
2. Желякьва Е.Т., Новиков О.О., Писеров Д.И. Исследование эфирного масла шишкоягод Juniperus Communis различного происхождения в рамках научного направления и фармацевтический ремейк // Современные проблемы науки и образования. – №4. – 2015. – С.2–10.
3. Желякьва Е.Т., Новиков О.О., Писеров Д.И. Можжевельник фитохимия и фармокология рода Juniperus Communis. – М: изд-во РАМН, 2014. – 178 с.
4. Кароматов И.Ж., Давлатова М.С. Можжевельник в народной и научной медицине // Электронный научный журнал “Биология и интегративная медицина”. – №1 (18). – 2018. – С. 87–91.
5. Asih Imulda Hari Purvani, Riesta Primaharinastiti, Mochammad Yuwono. HPLC Method Optimization for Simultaneous Determination of Quercetin, Luteolin, Sinensetin, and Stigmasterol in Herbal Medicines // Journal Farmasi Dan ILMU Kefarmasian Indonesia. Vol. 9(1). Pp. 62–68. doi:10.20473/jfiki.v9i12022.62-68.
6. Elboughdiri N, Ghernaout D, Kriaa K, Jamoussi B. Enhancing the Extraction of Phenolic Compounds from Juniper Berries Using the Box-Behnken Design // ACS Omega. 2020. Oct 21. Vol. 5(43):27990-28000. doi: 10.1021/acsomega.0c03396.
7. Flavonoids and biflavonoids in Tuscan berries of Juniperus Communis: detection and quantation by HPLC/DAD/ESI/MS // Journal Agricultural Food Chemistry. –2007. Vol. 55 (16). Pp. 6596–6602.
8. Höferl M, Stoilova I, Schmidt E, Wanner J, Jirovetz L, Trifonova D, Krastev L, Krastanov A. Chemical Composition and Antioxidant Properties of Juniper Berry (Juniperus communis L.) Essential Oil. Action of the Essential Oil on the Antioxidant Protection of Saccharomyces cerevisiae Model Organism // Antioxidants (Basel). 2014. Vol. 3(1). Pp. 81–98. doi: 10.3390/antiox3010081.
9. Innocenti M., Michellozi M., Giaccherrini C., Leri F., Vincieri F.F., Mulinacci N. Assessment report on juniperus communis L, pseudo-fructus // Committee on Herbal Medicinal Products. 2009. Vol. 12. 21 p.
10. Ismailova M.G., Shermatova I.B., Ismailova P.L., Ishimov U.J. Study of the role of some Scutellaria Iscandaria L. extract’s flavonoids on nanosilver synthesis // World Journal of Pharmaceutical Sciences. 2020. Vol. 8(2). Pp. 19–25.
11. Natalizia Miceli, Ada Trovato, Francesco Cacciola. Comparative Analysis of Flavonoid Profile, Antioxidant and Antimicrobial Activity of the Berries of Juniperus communis L. var. communis and Juniperus commu // Journal Agricaltural Food Chemistry. 2009. Vol. 57 (15). Pp. 6570–6577.
12. Semerdjiyeva I., Radoukova T. Biological Activity of Essential Oils of Four Juniper Species and Their Potential as Biopesticides // Molecules. 2021. Vol. 26 (21). P. 6358. https://doi.org/10.3390/molecules26216358