КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЛАВАНОИДОВ В ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОМ РАСТИТЕЛЬНОМ СБОРЕ «LORSEPTIL-ETD» МЕТОДОМ ВЭЖХ

АННОТАЦИЯ

В работе представлено количественное определение суммы флавоноидов в растительном сборе Lorseptil-ETD, обладающем противовоспалительным действием, с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Флавоноиды являются одной из основных групп биологически активных веществ растительного происхождения, определяющих противовоспалительную, антиоксидантную и капилляроукрепляющую активность фитопрепаратов. Контроль их содержания является важным этапом стандартизации и оценки качества лекарственного растительного сырья и сборов.

Цель исследования заключалась в разработке и валидации методики количественного определения суммы флавоноидов в сборе Lorseptil-ETD методом ВЭЖХ. Анализ проводился на жидкостном хроматографе с использованием колонки C18 и градиентного режима элюции. Идентификация флавоноидов осуществлялась по времени удерживания, а количественное определение — по площади пиков с пересчетом на рутин в качестве стандартного образца.

В ходе исследования установлено содержание суммы флавоноидов в сборе, подтверждена воспроизводимость и точность методики. Результаты свидетельствуют о том, что сбор Lorseptil-ETD содержит достаточное количество флавоноидов, обеспечивающих его противовоспалительное действие.

Разработанная методика может быть рекомендована для включения в нормативную документацию с целью стандартизации и контроля качества сбора Lorseptil-ETD.

ABSTRACT

The present study reports the quantitative determination of total flavonoids in the herbal collection Lorseptil-ETD, which exhibits anti-inflammatory activity, using high-performance liquid chromatography (HPLC).

Flavonoids represent one of the main groups of biologically active plant-derived compounds responsible for the anti-inflammatory, antioxidant, and capillary-strengthening effects of herbal medicinal products. Monitoring their content is an important stage in the standardization and quality assessment of medicinal plant raw materials and herbal preparations.

The aim of the study was to develop and validate a method for the quantitative determination of total flavonoids in the Lorseptil-ETD collection by HPLC. Analysis was performed on a liquid chromatograph using a C18 column and a gradient elution program. Flavonoids were identified by their retention times, and their content was quantified based on peak areas, recalculated in terms of rutin as a reference standard.

The study established the total flavonoid content in the collection and confirmed the reproducibility and accuracy of the method. The results indicate that the Lorseptil-ETD collection contains a sufficient amount of flavonoids, contributing to its anti-inflammatory activity.

The developed method can be recommended for inclusion in regulatory documentation for the purpose of standardization and quality control of the Lorseptil-ETD collection.

Ключевые слова: сухой экстракт, рутин, флавоноиды, ВЭЖХ.

Keywords: dry extract, rutin, flavonoids, HPLC.

Введение

Многокомпонентные лекарственные средства давно применяются в медицинской практике благодаря их эффективности и мягкому действию, а также отсутствию, как правило, нежелательных побочных эффектов при длительном использовании и удобству приготовления. В Узбекистане имеется достаточная сырьевая база по многим видам лекарственных растений, а также накоплен опыт их производства и клинического применения.

Многокомпонентные лекарственные средства из растительного сырья обладают рядом преимуществ перед другими лекарственными средствами: возможность обеспечения основного фармакологического эффекта в сочетании с комплексным воздействием на организм в целом, мягкость действия и, как правило, отсутствие нежелательных побочных эффектов. Они достаточно просты в промышленном производстве и относительно экономичны. Лечение многокомпонентными растительными средствами обычно более эффективно, чем применением отдельных растений.

Остаётся актуальной задача разработки методов контроля качества таких средств [1–3].

Цель исследования: Разработка методики количественного определения флавоноидов в сборе противовоспалительного действия.

Результаты.

Количественное определение флавоноидов в сборе противовоспалительного действия проводилось методом ВЭЖХ. Хроматографирование выполнялось на жидкостном хроматографе фирмы Agilent Technologies (США), Agilent 1200 series, с использованием программного обеспечения Chemstation 09.03.a, градиентного насоса и спектрофотометрического детектора.

Разделение осуществлялось на колонке размером 4,6 × 150 мм, заполненной сорбентом Zorbax Eclipse C18 с размером частиц 5 мкм.

Подвижная фаза состояла из:

• (A) 0,3% раствора фосфорной кислоты, (B) метанола

Применялся градиентный режим элюции.

Детектирование проводилось при длине волны 357 нм, соответствующей λmax рутина. Скорость потока элюента составляла 1 мл/мин, объём вводимой пробы — 10 мкл, температура колонки — 35°C. Продолжительность анализа — 30 минут.

Для идентификации рутина в препарате параллельно хроматографировали раствор РСО (см. таблицу 1). Идентификация рутина осуществлялась по характерному времени удерживания (см. рисунок 1).

Таблица 1

Условия подбора градиентного режима ВЭЖХ для количественного определения флавоноидов в сборе противовоспалительного действия

Рисунок 1. ВЭЖХ хроматограмма рутина

Содержание рутина в составе сбора рассчитывали по следующей формуле:

где:

S_стд – площадь основных пиков на хроматограмме растворов  РСО рутина , mAU;

S_исл – площадь пика рутина  на хроматограмме испытуемого образца, mAU;

а_ст – навеска РСО рутина , г;

P – содержание рутина  в стандартном образце, %.

Примечание: Приготовление раствора РСО рутина. 0,0055 г рутина (ГФ Х) растворяли в метаноле в пикнометре вместимостью 10 мл и доводили объем  до метки этим же растворителем.

Таблица 2.

Некоторые метрологические характеристики методики количественного определения флаваноидов в сборе

Как видно из таблицы 2, содержание флаваноидов в сборе противовоспалительного действия в пересчете на рутин составил в среднем 0,3% , при этом относительная ошибка метода количественного определения с применением метода ВЭЖХ составил 2,78 % , что не превышает пределы метода.

Выводы

В результате проведённого исследования разработана и апробирована методика количественного определения суммы флавоноидов в растительном сборе Lorseptil-ETD противовоспалительного действия методом ВЭЖХ.

Установлено, что предложенный метод является специфичным, воспроизводимым и пригодным для стандартизации данного сбора. Полученные данные подтверждают наличие в составе Lorseptil-ETD значимого содержания флавоноидных соединений, которые обеспечивают его противовоспалительное и антиоксидантное действие.

Разработанная методика демонстрирует достаточную точность и чувствительность, что позволяет рекомендовать её для включения в нормативно-техническую документацию при контроле качества и стандартизации сборов Lorseptil-ETD.

Таким образом, количественное определение суммы флавоноидов методом ВЭЖХ является обоснованным критерием оценки качества и фармакологической активности сборов Lorseptil-ETD, что повышает научную обоснованность их применения в медицинской практике.

Список литературы:

1. Лекарственные растения: [арх.17 октября 2022]// Лас-Тунас — Ломонос [Электронный ресурс]. — 2010.— С.193—196.— (Большая российская энциклопедия: [в 35 т.]/ гл. ред. Ю. С. Осипов; 2004—2017, т. 17).—ISBN 978-5-85270-350-7.
2. Гончарова Т. А. Энциклопедия лекарственных растений (в 2-х томах).—М.: Дом МСП, 1997.
3. Лекарственные растения// Биология/ [авт. ст.: Г. А. Белякова и др.]; Гл. ред. А. П. Горкин. — М. : Росмэн, 2006.— 560 с.: портр., цв. ил.— (Современная иллюстрированная энциклопедия).