МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ПРОФИЛЯ ПЕРЕПЕЛА ЯПОНСКОГО (Coturnix japonica)

АННОТАЦИЯ

Гематологические исследования являются ключевым инструментом мониторинга здоровья в птицеводстве, однако интерпретация данных требует учёта видовых особенностей системы крови авиан. Цель работы — изучение морфофункциональных характеристик форменных элементов крови перепелов японских (Coturnix japonica) породы Фараон. Установлено, что лейкоцитарный профиль характеризуется выраженным лимфоцитарным сдвигом 61,4±3,7% при доле гетерофилов 23,7±2,1%. Определены морфометрические параметры лейкоцитов. Индекс H/L (0,39) соответствует физиологической норме, что свидетельствует об отсутствии стрессовой нагрузки. Полученные данные могут служить референсными значениями для оценки иммунного статуса и ранней диагностики патологий в промышленном перепеловодстве.

ABSTRACT

Hematological studies are a key tool for monitoring health in poultry farming, however, the interpretation of data requires taking into account the specific features of the avian blood system. The purpose of the work is to study the morphofunctional characteristics of the shaped blood elements of Japanese quails (Coturnix japonica) of the Pharaoh breed. It was found that the leukocyte profile is characterized by a pronounced lymphocytic shift of 61.4±3.7% with a proportion of heterophiles of 23.7±2.1%. Morphometric parameters of leukocytes were determined. The H/L index (0.39) corresponds to the physiological norm, which indicates the absence of stress. The data obtained can serve as reference values for assessing the immune status and early diagnosis of pathologies in industrial quail farming.

Ключевые слова: птицы, перепела, гематология, лейкоциты, гетерофилы, лимфоциты, иммунный статус, стресс, морфология крови.

Keywords: birds, quails, hematology, leukocytes, heterophiles, lymphocytes, immune status, stress, blood morphology.

Введение

Интенсификация птицеводства требует постоянного мониторинга здоровья поголовья. Гематологические исследования являются одним из наиболее информативных методов оценки физиологического статуса и ранней диагностики заболеваний у сельскохозяйственной и дикой птицы. Однако, интерпретация результатов анализа крови птиц требует специфических знаний, так как система крови птиц имеет ряд фундаментальных отличий от системы крови млекопитающих.

Актуальность темы обусловлена необходимостью стандартизации подходов к лабораторной диагностике в ветеринарной медицине. Ошибки в идентификации клеточных элементов, в частности смешение гетерофилов с эозинофилами или тромбоцитов с лимфоцитами, могут привести к неверному диагнозу и неэффективной терапии. Целью данной работы является систематизация данных о морфофункциональных особенностях лейкоцитарного звена крови птиц и определение их диагностической ценности [1,8,14].

Лейкоцитарная формула птиц характеризуется высоким видовым разнообразием. В отличие от млекопитающих, у птиц в периферической крови циркулируют пять основных типов лейкоцитов: гетерофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы и базофилы.

Функциональным аналогом нейтрофилов млекопитающих у птиц являются гетерофилы. Морфологически гетерофилы отличаются от нейтрофилов характером зернистости: их цитоплазма содержит крупные веретенообразные или палочковидные гранулы, окрашивающиеся в оранжево-красный цвет кислыми красителями. Ядро чаще всего палочковидное или сегментированное, но сегментация выражена слабее, чем у нейтрофилов млекопитающих. Функционально гетерофилы обладают фагоцитарной активностью, однако их бактерицидность ниже, чем у нейтрофилов, что компенсируется высокой скоростью миграции в очаг воспаления [2,15].

У здоровых взрослых птиц лимфоциты часто преобладают в лейкоцитарной формуле, что отличает их от многих млекопитающих, где доминируют нейтрофилы. Размер лимфоцитов варьирует от малых до больших форм. У молодняка наблюдается физиологический лимфоцитоз, который к периоду половой зрелости сменяется равновесием с гетерофилами. Важно отметить, что у птиц отсутствуют В- и Т-лимфоциты в классическом понимании морфологии мазка, их дифференциация возможна только иммуногистохимическими методами [7,15].

Количество эозинофилов у птиц значительно колеблется в зависимости от вида. У некоторых хищных птиц они могут достигать 10–15%, тогда как у кур составляют менее 2%. Гранулы эозинофилов птиц округлые, крупные, окрашиваются в ярко-красный цвет. Их увеличение (эозинофилия) часто ассоциировано с паразитарными инвазиями, однако у птиц эта связь менее выражена, чем у млекопитающих [3].

Самый редкий тип лейкоцитов - базофилы. В мазках здоровых птиц их обнаружение затруднено. Гранулы базофилов крупные, темно-фиолетовые, часто закрывают ядро. Повышение их количества отмечается при аллергических реакциях и некоторых вирусных инфекциях.

Моноциты - крупные клетки с бобовидным или подковообразным ядром. Обладают высокой фагоцитарной активностью и способностью трансформироваться в макрофаги тканей. Моноцитоз у птиц часто свидетельствует о хронических воспалительных процессах или гранулематозных заболеваниях (например, туберкулез) [4,10].

Хотя тромбоциты не относятся к лейкоцитам, при подсчете лейкоцитарной формулы их часто ошибочно принимают за лимфоциты. Тромбоциты птиц намного крупнее чем у млекопитающих, размером с лейкоцит, ядерные, веретенообразной или округлой формы, с бледно-голубой цитоплазмой и фиолетовым ядром. Их наличие усложняет автоматизированный подсчет, поэтому ручная микроскопия остается предпочтительным методом [5,11].

Соотношение гетерофилов и лимфоцитов (H/L). Одним из ключевых показателей в физиологии птиц является соотношение гетерофилов к лимфоцитам. В норме у кур оно составляет примерно 0,3–0,5. При стрессе (тепловом, транспортном, инфекционном) уровень кортикостерона повышается, что приводит к гетерофилии и лимфопении. Увеличение индекса H/L выше 1,0 считается достоверным маркером хронического стресса и снижения иммунной резистентности [8,9].

Материал и методы исследования Объектом исследования избраны клинически здоровые перепела японские (Coturnix japonica) породы Фараон (n=15) в возрасте 20 суток, содержащиеся в виварии МГУТУ имени К.Г. Разумовского (ПКУ) при стандартных условиях микроклимата и полноценном кормлении. Забор крови осуществляли из подкрыльцовой вены (Vena axillaris) в утренние часы до кормления с соблюдением правил асептики и биоэтики. Всего было отобрано и проанализировано 30 проб крови (по две от каждой птицы для обеспечения воспроизводимости результатов).

Мазки крови фиксировали в 96% этиловом спирте в течение 10 минут и окрашивали по методу Романовского–Гимза. Микроскопию проводили с использованием иммерсионной системы (увеличение ×1000) [13]. В каждом мазке дифференцировали 100 лейкоцитов с учётом морфологических критериев, описанных в атласах авианной гематологии. Морфометрию всех форменных элементов выполняли с помощью окуляр-микрометра и программного обеспечения, результаты обрабатывали статистически с расчётом средней арифметической и стандартной ошибки. Дополнительно рассчитывали соотношение гетерофилов к лимфоцитам (индекс H/L) как интегральный показатель стрессоустойчивости.

Результаты исследования В ходе микроскопического и морфометрического анализа установлено, что лейкоцитарный профиль перепелов породы Фараон характеризуется выраженным лимфоцитарным сдвигом. Доля лимфоцитов составила 61,4±3,7%, что соответствует физиологической норме для взрослых птиц данного вида и отражает высокую активность гуморального звена иммунитета. Морфометрические параметры лимфоцитов: длина клетки 8,14±0,22 мкм, ширина 8,17±0,31 мкм; ядро овальное, длина 6,39±0,25 мкм, ширина 5,76±0,24 мкм.

Гетерофилы, выполняющие функцию фагоцитов первой линии защиты, представлены в количестве 23,7±2,1%. Морфологически гетерофилы имели сегментированные ядра с 2–5 долями и цитоплазму, заполненную палочковидными эозинофильными гранулами оранжево-красного цвета. Морфометрия: длина клетки 9,58±0,22 мкм, ширина 9,07±0,25 мкм. Данные параметры полностью соответствуют описаниям для Coturnix japonica.

Эозинофилы 2,1±0,17% отличались округлыми крупными гранулами ярко-красного цвета и слабо сегментированным ядром; размеры клетки: длина 9,83±0,30 мкм, ширина 8,78±0,23 мкм. Моноциты 4,7±0,8% характеризовались бобовидным или подковообразным ядром и базофильной цитоплазмой без выраженной зернистости; морфометрия: длина 9,48±0,29 мкм, ширина 8,52±0,27 мкм. Базофилы (1,7±0,5%) встречались единично, их гранулы были крупными, тёмно-фиолетовыми, часто маскирующими ядро; размеры: длина 6,60±0,25 мкм, ширина 6,31±0,16 мкм. На рисунке 1 представлены фотографии лейкоцитов.

Рисунок 1. Лейкоциты в мазке крови перепела японского (Coturnix japonica). Окраска по Романовскому–Гимзе. Увеличение ×1000 (иммерсионная система). 1-лимфоцит, 2 – моноцит, 3 -базофил, 4 -гетерофил

В рамках эксперимента оценен гематологический стресс-индекс H/L. Рассчитанное соотношение гетерофилов к лимфоцитам (23,7/61,4 = 0,39) соответствует физиологической норме (0,3–0,5). Данный показатель свидетельствует об отсутствии хронического стресса и сбалансированном иммунном статусе экспериментальной птицы на момент исследования.

Отдельного внимания заслуживает выявленная гетерогенность популяции гетерофилов: наряду со зрелыми сегментоядерными формами регистрировались юные клетки с палочковидными ядрами и менее интенсивной грануляцией (длина 10,20±0,35 мкм, ширина 8,90±0,40 мкм). Данное явление указывает на физиологическую регенерацию гранулоцитарного ростка и высокую пролиферативную активность костного мозга у птиц в возрасте 20 суток.

Обсуждение Полученные данные подтверждают видовые особенности гемограммы японских перепелов: доминирование лимфоцитов (>60%) в лейкоцитарной формуле, преобладание гетерофилов среди гранулоцитарного звена, наличие ядросодержащих эритроцитов и веретеновидных тромбоцитов. Лимфоцитарный профиль отражает напряжённость гуморального иммунитета, характерную для птиц, активно контактирующих с антигенной нагрузкой окружающей среды [10,11].

Морфометрические параметры лейкоцитов, полученные в ходе исследования, коррелируют с данными литературы по Coturnix japonica, однако отмечены некоторые породные особенности: незначительное увеличение размеров гетерофилов и эозинофилов у перепелов породы Феникс по сравнению со стандартными линиями, что может быть связано с селекционными особенностями и адаптивными реакциями. Данные параметры согласуются с результатами морфометрических исследований других авторов [11,16].

Рассчитанное соотношение гетерофилов к лимфоцитам (H/L = 23,7/61,4 ≈ 0,39) находится в пределах физиологической нормы (0,3–0,5) для клинически здоровой птицы. Данный показатель свидетельствует об отсутствии выраженной стрессовой нагрузки у исследуемой группы перепелов породы Фараон, что подтверждает адекватность условий содержания и кормления. Известно, что повышение индекса H/L выше 1,0 является достоверным маркером хронического стресса, иммуносупрессии и снижения продуктивных качеств птицы [6,9,12].

Выявленная гетерогенность гетерофилов с присутствием юных форм может служить индикатором физиологической активности миелопоэза и должна учитываться при дифференциальной диагностике воспалительных процессов. Морфометрия тромбоцитов позволяет надёжно дифференцировать их от малых лимфоцитов, что особенно важно при ручном подсчёте лейкоцитарной формулы.

Заключение Проведённое исследование морфологических и морфометрических особенностей клеток крови японских перепелов породы Фараон позволило установить видовые и породные характеристики гемограммы. Лейкоцитарный профиль характеризуется лимфоцитарным сдвигом (61,4±3,7%), преобладанием гетерофилов среди гранулоцитов (23,7±2,1%) и наличием юных форм, указывающих на физиологическую регенерацию. Морфометрические параметры лейкоцитов: лимфоциты 8,14±0,22 мкм; гетерофилы 9,58±0,22 мкм; эозинофилы 9,83±0,30 мкм; моноциты 9,48±0,29 мкм; базофилы: 6,60±0,25 мкм, соответствуют видовым нормам с учётом породных особенностей. Результаты данной работы могут служить основой для разработки гематологических нормативов, используемых при мониторинге физиологического статуса птицы и ранней диагностики патологий в условиях промышленного перепеловодства.

Список литературы:

1. Колесник, Е. А. Характеристика проблематики морфофизиологии клеток крови неонатального онтогенеза кур. Сообщение I // АПК России. – 2019. – Т. 26, № 4. – С. 637–643.
2. Lucas A.M., Jamroz C. Atlas of Avian Hematology. Washington: USDA, 1961. 115 p.
3. Колесник, Е. А. Формы дегенерации клеток крови, их физиологическое и клиническое значение, механизмы образования, тени клеток в мазках крови птиц // Аграрная наука. – 2024. – № 1. – С. 30–37.
4. Харлан, А.Л. Морфология иммунной системы птиц /монография /А. Л. Харлан и др. ; под ред. Е. В. Зайцевой//Федеральное гос. бюджетное образовательное учреждение высш. проф. образования Брянский гос. ун-т им. И. Г. Петровского, Каф. зоологии и анатомии. — Брянск : Ладомир, 2011. — 109 с. : ил. : 21 см.; ISBN 978-5-91516-153-4.
5. Campbell T.W. Avian Hematology and Cytology. 4th ed. Ames: Wiley-Blackwell, 2015. 304 p.
6. Gross W.B., Siegel H.S. Evaluation of the heterophil/lymphocyte ratio as a measure of stress in chickens // Avian Diseases. 1983. Vol. 27. No. 4. P. 972–979.
7. Campbell, T. W. Exotic Animal Hematology and Cytology / T. W. Campbell, K. R. Grant. – 5th ed. – Hoboken : Wiley-Blackwell, 2022. – 416 p. – ISBN 9781119669874.
8. Davis, A. K. The use of leukocyte profiles to measure stress in vertebrates: a review for ecologists / A. K. Davis, D. L. Maney, J. C. Maerz // Functional Ecology. – 2008. – Vol. 22, № 5. – P. 760–772.
9. Малков С. В., Красноперов А. С., Порываева А. П., Опарина О. Ю., Вершинина И. Ю., Бадов М. Д. ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ И ЛЕЙКОЦИТАРНЫЕ ИНДЕКСЫ КУР-НЕСУШЕК В УСЛОВИЯХ ТЕМПЕРАТУРНОГО СТРЕССА // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. 2022. №4. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/gematologicheskie-pokazateli-i-leykotsitarnye-indeksy-kur-nesushek-v-usloviyah-temperaturnogo-stressa (дата обращения: 19.03.2026).
10. Вертипрахов В.Г. Физиология системы крови. Морфо-биохимические исследования крови у сельскохозяйственной птицы : учебное пособие для вузов / В.Г. Вертипрахов, Д.А. Ксенофонтов, Е.А. Колесник, Н.В. Овчинникова. – Санкт-Петербург : Лань, 2023. – 108 с.
11. Bhattacherjee A., Mohanty P.K., Mallik B.K. Morphometrical Analysis of Blood Cells of Japanese quail (Coturnix coturnix japonica) in two different Age Groups // International Journal of Basic Sciences. – 2014. – Vol. 3, no. 9. – P. 28–33. – URL: https://isca.me/IJBS/Archive/v3/i9/6.ISCA-IRJBS-2014-73.pdf (дата обращения: 15.03.2026
12. Донник И. М., Дерхо М. А., Харлап С. Ю. Клетки крови как индикатор активности стресс-реакций в организме цыплят // АВУ. 2015. №5 (135). URL: https://cyberleninka.ru/article/n/kletki-krovi-kak-indikator-aktivnosti-stress-reaktsiy-v-organizme-tsyplyat (дата обращения: 19.03.2026).
13. Кондрахин, И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики : cправочник / [И. П. Кондрахин и др.] ; под общ. ред. И. П. Кондрахина. – Москва : КолосС, 2004. – ISBN 5-9532-0165-6. – EDN QKWKND.
14. Евгений Анатольевич Колесник, Марина Аркадьевна Дерхо, Максим Борисович Ребезов Функциональные морфоденситометрические параметры хроматина ядра и цитоплазмы эритробластов и эритроцитов птиц в постэмбриональном онтогенезе // АВУ. 2024. №1. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/funktsionalnye-morfodensitometricheskie-parametry-hromatina-yadra-i-tsitoplazmy-eritroblastov-i-eritrotsitov-ptits-v (дата обращения: 19.03.2026).
15. Nirmalan G.P. Haematology of the Japanese quail (Coturnix coturnix japonica) // British Poultry Science. – 1971. – Vol. 12, no. 4. – P. 425–431. – DOI: 10.1080/00071667108415903.
16. Tadjalli M., Nazifi S., Eemanparvar A. Normal cellular morphology of the blood of Japanese quail (Coturnix coturnix japonica) // Comparative Clinical Pathology. – 2003. – Vol. 12. – P. 102–105. – DOI: 10.1007/s00580-003-0485-z.