ВОДОРАСТВОРИМЫЕ ВИТАМИНЫ ЛИСТЬЕВ И СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛИСТЬЕВ ПЕРСИКА ОБЫКНОВЕННОГО (Persica vulgaris Mill.)

АННОТАЦИЯ

Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) листьев и сухого экстракта листьев персика обыкновенного (Persica vulgaris Mill.), было установлено содержание 6 водорастворимых витаминов: витамины С, РР и 4 витамина группы В (В_1, В_2, В_6, В₁₂).

Количественное содержание суммы витаминов сухого экстракта (4,57 мг/г.) в три раза превышает их содержание в листьях (1,57 мг/г.)

Сравнительные результаты содержания пиридоксина и тиамина, свидетельствуют, что в условиях получения сухого экстракта они количественно сохраняются, в то время как содержание остальных витаминов сухом экстракте уменьшаются на 30%.

ABSTRACT

By the method of high-performance liquid chromatography (HPLC) of leaves and dry extract of peach leaves (Persica vulgaris Mill.), the content of 6 water-soluble vitamins was determined: vitamins C, PP and 4 vitamins of group B (B1, B2, B6, B12).

The quantitative content of the sum of vitamins in the dry extract (4.57 mg/g) is three times higher than their content in the leaves (1.57 mg/g).

Comparative results of the content of pyridoxine and thiamine indicate that under the conditions of obtaining a dry extract, they are quantitatively preserved, while for other vitamins their content decreases by 30% in the dry extract.

Ключевые слова: листья персика обыкновенного, водорастворимые витамины, аскорбиновая кислота, высокоэффективная жидкостная хроматография.

Keywords: common peach leaves, water-soluble vitamins, ascorbic acid, high-performance liquid chromatography.

Введение

Как известно, в мировом фармацевтическом секторе практически основная часть выпускаемых лекарственных средств производится из сырья лекарственных растений.

За последнее десятилетие одним из перспективных объектов для фитохимических исследований становятся листья плодово-ягодных деревьев, таких как листья кизила, грецкого ореха, каштана конского и др. [1]. Помимо пищевой ценности они имеют и высокое лекарственное значение, являясь сырьевым источником БАВ для применения в фармации, медицине, а возможности культивирования, несомненно расширяют области их эффективного использования.

Среди культивируемых плодовых деревьев привлекает внимание исследователей и персик обыкновенный, обладающий лечебными свойствами и широко используемый в народной медицине, а также в виде биологически-активных добавок (БАД) в современной парафармацевтике.

Листья персика обыкновенного (Persica vulgaris Mill.), благодаря наличию в его составе веществ фенольной природы (флавоноиды, полифенолы) и других биологически-активных компонентов, обладают перспективностью для получения экстракционных препаратов, фитосубстанций и создания безопасных лекарственных средств на его основе.

Установлено, что растительные препараты персика стимулируют иммунитет, усиливают фагоцитарную активность клеток, повышают выработку антител. Традиционно листья персика используются из-за их противоглистных, слабительных и седативных свойств [7]. На листьях персика уже проведено несколько исследований с целью охарактеризовать их антибактериальные, противомалярийные, противоастматические, антикоагулянтные, гепатопротекторные и спазмогенные свойства [2].

Экстракт листьев персика рекомендуется для профилактики ОРВИ, гинекологических заболеваний, обладают адаптогенным действием, стимулирует иммунную систему.  В настоящий момент экстракты из листьев персика обыкновенного используют исключительно в составе биологически активных добавок, таких как Олексин, Акан, Флавоперсин, Персифен, Персикапс [3]. 

Научные исследования, проведенные авторами, также направлены на получение экстракта листьев персика обыкновенного, произрастающего в Республике Каракалпакстан - эпицентре экологического кризиса, вызванного усыханием Аральского моря.

Ранее [4,5] мы сообщали о результатах анализа химических компонентов листьев персика обыкновенного. В данном сообщении представлены результаты сравнительного анализа витаминного состава листьев и сухого экстракта листьев персика обыкновенного.

Целью исследования является определение качественного и количественного содержания витаминов листьев и сухого экстракта листьев персика обыкновенного, произрастающего в Каракалпакстане.

Материалы и методы.

Листья персика обыкновенного собраны в сентябре 2023 года в Кунградском районе Республики Каракалпакстан и стандартизированы [6] Сухой экстракт получен из листьев персика обыкновенного методом мацерации [7].

Витамины определены методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Shimadzu HPLC-10 VP (Япония)) с УФ-детектором с переменной длиной волны, градиентным насосом и термостатируемой колонкой; Колонка: Hypersil ODS, 150 мм.4,6 мм; Детекция УФ при 270 нм;  Скорость потока 1 мл/мин. Объём вводимой пробы 20 мкл; Температура колонки С. Мобильная фаза, раствор А (буфер из натрия 1-гексансульфоната. кислоты уксусной, триэтиламина, рН 3,0); Раствор В (метанол). Стандартные растворы: 1. Стандартный раствор витамин В₁ (раствор1); 2. Стандартный раствор витамин В₂ (раствор2); 3. Стандартный раствор витамин В₆ (раствор 3); 4. Смесь стандартных растворов витаминов В₁, В₂, В₆, никотинамида и витамина С (раствор 4).

Градиентный режим:

Приготовление стандартных растворов.

Стандартный раствор витамин В₁ (Стандартный раствор1). Около 20 мг (точная навеска) порошка РСО тиамина гидрохлорида (НД 42-10173-06, НД 42-14058-06, ВР, USP, Eur.Ph, CР) помещают в мерную колбу объёмом 20 мл, растворяют в 15 мл воды очищенной и доводят объём раствора этим же растворителем до метки.

Стандартный раствор витамин В₂ (Стандартный раствор 2). Около 6,0 мг (точная навеска) порошка РСО рибофлавина (НД 42-11641-05, НД 42-14222-06, ВР, USP, EUR. Ph, CP) помещают в мерную колбу объёмом 100 мл,

Прибавляют 80-90 мл воды очищенной и нагревают на водяной бане при 80-85^оС до полного растворения. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, доводят объём раствора водой, очищенной до метки, и тщательно перемешивают.

Стандартный раствор витамин В₆ (Стандартный раствор 3). Около 20 мг (точная навеска) порошка РСО пиридоксина гидрохлорида (НД 42-9472-06, НД 42-14723-07, ВР, USP, Eur.Ph, CP) помещают в мерную колбу объёмом 20 мл, растворяют в 15 мл воды очищенной и доводят объём раствора этим же растворителем до метки.

Смесь стандартных растворов витаминов В₁, В₂, В₆, никотинамида и витамина С. Около 7,5 мг (точная навеска) порошка РСО никотинамида и около 50 мг (точная навеска) порошка РСО аскорбиновой кислоты помещают в мерную колбу объёмом 50 мл растворяют в 20 мл воды очищенной. В эту же колбу прибавляют 1,0 мл стандартного раствора витамина В₁ (Стандартный раствор 1), 15 мл стандартного раствора витамин В₂ (Стандартный раствор 2)   и 5,0 мл стандартного раствора витамин В₆ (Стандартный раствор 3), тщательно перемешивают и доводят объем раствора водой очищенной до метки (раствор 4).

Приготовление испытуемого раствора. Около 685 мг (точная навеска) порошка исследуемого образца  помещают в мерную колбу объёмом 50 мл, прибавляют 30 мл воды очищенной и нагревают на водяной  бане при температуре 70-80^оС в течение 15 мин. Затем колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры, доводят объём раствора водой очищенной до метки тщательно перешивают. Полученный раствор центрифугируют при 7000 об/ мин в течение 10 мин. Верхний слой декантируют и фильтруют через мембранный фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм.

Проведение расчетов. Содержание витамина в анализируемом образце вычисляют по формуле:

где: S_стд -площади основных пиков хроматограммы стандартных растворов аскорбиновой кислоты/никотинамида/тиамина/рибофлавина/

пиридоксина/цианкобаламина, mAU;

S_исп  -площади основных пиков витаминов испытуемого образца, mAU;

а_стд -навеска стандартных образцов, РСО аскорбиновой кислоты/ никотинамида/тиамина/рибофлавина/пиридоксина/цианкобаламина, г;

а _исп -навеска испытуемого образца, г;

P -содержание в стандартном образце, %.

Результаты и обсуждение

Витамины – незаменимые органические вещества, биологические катализаторы химических реакций, протекающих в организме человека. Они активно участвуют в обмене веществ и поступают в организм человека практически полностью из внешней среды. Для поддержания баланса витаминов в организме широкое применение нашли комплексы витаминных средств, витаминизированные продукты и биологически активные добавки к пище (БАД) [8;9].

Наиболее современным и удобным методом анализа водорастворимых витаминов является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, благодаря высокой информативности, благоприятным условиям анализа и относительной простоте подготовки пробы образца.

Результаты исследования по изучению качественного и количественного содержания витаминов методом ВЭЖХ представлены на рисунках 1, 2 и в таблице1.

Рисунок 1. Хроматограмма стандартных образцов витаминов

Рисунок 2. Хроматограмма витаминов сухого экстракта листьев персика обыкновенного

Таблица 1.

Водорастворимые витамины листьев и сухого экстракта персика обыкновенного

В исследуемых образцах листьев и сухого экстракта листьев персика обыкновенного методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, было установлено содержание 6 водорастворимых витаминов: витамины С, РР и 4 витамина группы В (В_1, В_2, В_6, В₁₂).

Количественное содержание суммы витаминов составляет 1,57 мг/г для листьев персика обыкновенного, а для сухого экстракта - 4,57 мг/г, что приблизительно в три раза превышает их содержание в листьях.

Доля витамина С максимальна для листьев (0,49 мг/г), что составляет 31,21% от общей суммы витаминов. Его доля в экстракте хотя и выше, чем в листьях в 2 раза, но уступает в процентном отношении (22,54%) к общей сумме витаминов.

Высокое содержание витамина С, обладающего антиоксидантной активностью, обеспечивает защиту клеток организма от вредных свободных радикалов и инфекций, а также от повреждений молекул белков, жиров, углеводов и ДНК. Помимо устранения свободных радикалов, витамин С помогает метаболизировать жиры и синтезировать коллаген и нейротрансмиттеры. В сочетании с витаминами группы В, обладающих свойствами коферментов и поддерживающих процессы обмена веществ, значительно генерируют энергию организма [10;11].

Общее содержание витаминов группы В составляет 0,98 мг/г и 3,33мг/г, а в процентном соотношении - 62,42% и 72,87% для листьев и сухого экстракта соответственно.

Среди витаминов группы В максимальное содержание приходится на витамин В6 - Пиридоксин, (0,39 мг/г) и 1,84 мг/г в листьях и сухом экстракте соответственно по отношению к общему количеству витаминов. Такое высокое содержание витамина В6 позволяет использовать их при нарушениях нормальной деятельности нервной системы, органов кроветворения, печени.

Следующим по количественному содержанию выступает витамин В1- тиамин, его содержание приблизительно в 2 раза меньше витамина В6. Сравнительные результаты содержания пиридоксина и тиамина, свидетельствуют, что в условиях получения сухого экстракта они количественно сохраняются, в то время как в сухом экстракте витамины В2 и В12 уменьшаются на 30%.

Что касается ниацина, его содержание наименьшее среди обнаруженных витаминов листья персика обыкновенного. Как и все витамины группы B, ниацин является коферментом, а это означает, что он активизирует и ускоряет различные процессы в организме. Он необходим для производства энергии и восстановления ДНК. Известно, что организм может производить ниацин из аминокислоты триптофана, но его недостаточно. Учитывая, что суточная норма ниацина для женщин составляет примерно 14 мг/день, а для мужчин 16 мг, возникает необходимость включения его в ежедневный рацион. И в этом плане листья и сухой экстракт листьев могут послужить дополнительным источником этого витамина [12].

Наименьшее содержание среди витаминов группы В приходится на Витамин B12 (0,11 и 0,21 мг/г в листьях и сухом экстракте соответственно). Содержание витамина В12 одинаково с ниацином как в листьях, так и в сухом экстракте. Витамин B12 помогает в производстве эритроцитов и обеспечивает правильное функционирование нервной системы. Обычно цианокобаламин в растительных продуктах не содержится или содержится в очень небольших количествах. Кроме того, витамин B12 из растений плохо усваивается, но поскольку печень хранит витамин B12, у большинства людей имеется запас этого питательного вещества, а не его дефицит [11;12]. Тем не менее, его наличие в листьях персика обыкновенного имеет определенную ценность в качестве растительного ресурса этого витамина.

Заключение

Таким образом, исследование водорастворимых витаминов листьев и сухого экстракта листьев персика обыкновенного (Persica vulgaris Mill.), произрастающего в стрессовых, экологически неблагоприятных условиях Каракалпакстана показало, что она может служить сырьевым источником витамина С, РР и витаминов группы В. Количественное содержание суммы витаминов составляет 1,57 мг/г. для листьев персика обыкновенного, а для сухого экстракта – 4,57мг/г., что приблизительно в три раза превышает содержание в листьях.

Сравнительные результаты содержания пиридоксина и тиамина, свидетельствуют, что в условиях получения сухого экстракта они количественно сохраняются, в то время как содержание остальных витаминов в сухом экстракте уменьшаются на 30%.

Список литературы:

1. Е.И. Молохова., Л.В. Иванцова., В.Д. Белоногова. Определение фитотехнологических параметров экстракта густого персика обыкновенного (Persica vulgaris Mill.) листьев//Разработка и регистрация лекарственных средств. Россия, 2022.11(4–1):57–63. -С.58
2. Amjad Ali., Muhammad Jamal Khan Khattak., Syed Noor Muhammad Shah., Mohib Shah., Sajjad Zaheer and Shahida Bibi. Comparative Effect of Foliar Application on Micronutrients Content in Peach Leaf and Fruit//Intl J Farm & Alli Sci. Vol., 3 (4): 382-388, 2014.
3. Л.В. Иванцова., В.Д. Белоногова., Д.К. Гуляев. К исследованию антиоксидантной активности листьев Персика обыкновенного Persica vulgarisMill. folia// Натуротерапия. Россия, 2019. № 3 (58), -С.10-13
4. Г.М. Абдурасулиева., Г.Е.Бердимбетова., Н.Т.Фарманова. Maкро-и микроэлементы листьев персика обыкновенного (Persiсa vulgaris Mill.) произрастающего в каракалпакстане//Инфекция Иммунитет и Фармакология. Ташкент, 2022. №4.- С.11-21.
5. G.M. Abdurasulieva., G.E. Berdimbetova., N.T. Farmanova. Сomparative study of the amino acid composition of common peach (Persica vulgaris Mill.) leaves grown in Karakalpakstan//European Chemical Bulletin ISSN 2063-5346. 2023, 12(3)-Р.1-10
6. Г.М. Абдурасулиева., Н.Т.Фарманова. Товароведческий анализ листьев персика обыкновенного (Persica vulgaris Mill.), произрастающего в Каракалпакстане//Фармацевтика журнали. Ташкент, 2023.Том 32-№1. -С.19.
7. G.M. Abdurasulieva., N.T. Farmanova., G.E. Berdimbetova., G.E. Sadikova Flavonoids in dry extract of Prunus Persica (L.) batsch (Persica vulgaris Mill.) //Универсум: Медицина и Фармакология. Москва, 2024.
8. О.В. Шелеметьева. Определение витаминов методом ВЭЖХ в премиксах, биологически активных добавках и пищевых продуктах. автореферат диссертации к.х.н.Томск, 2009г.
9. О.В. Иозефович., А.А. Рулева., С.М. Харит., Н.Н. Муравьева. Выбираем витамины// В помощь врачу. Вопросы современной педиатрии. Москва, 2010. Том 9. № 1. -С.109.
10. Е.В. Ших. Витамины с антиоксидантными свойствами в профилактике и лечении острых респираторных инфекций у детей//Обмен опытом. Москва, 2013.-С.142-144.
11. В.М.Коденцова Витамины. Москва, 2015.-С.15-18.
12. А.В. Марочков, С.А. Точило, В.В. Шваренок, У.С.Мигунова Применнение витаминов и микроэлементов в комплексном лечении критических состояний и синдрома полиорганной дисфункции// Методические рекомендации. Витебск, 2019 –С.9.