УГЛЕВОДНЫЙ СОСТАВ Elaeagnus angustifolia

АННОТАЦИЯ

Приведены данные по изучению углеводного состава растения Elaeagnus angustifolia L. Для изучения углеводного состава, определение массовой доли сахарозы, глюкозы, фруктозы и сорбита проводилась методом ВЭЖХ с рефрактометрическим детектором. Изучение качественного и количественного моносахаридного состава показало, что преобладающими в водорастворимом полисахаридном комплексе являются фруктоза 27,37% и глюкоза 35,44%.

ABSTRACT

The data on the study of the carbohydrate composition of the plant Elaeagnus angustifolia L. To study the carbohydrate composition, the determination of the mass fraction of sucrose, glucose, fructose and sorbitol was carried out by HPLC with a refractometric detector. The study of the qualitative and quantitative monosaccharide composition showed that fructose 27.37% and glucose 35.44% are predominant in the water-soluble polysaccharide complex.

Ключевые слова: Elaeagnus angustifolia L., моносахариды, глюкоза, фруктоза, ВЭЖХ.

Keywords: Elaeagnus angustifolia L., monosaccharides, glucose, fructose, HPLC.

Введение

Углеводы, как белки и пептиды, являются важнейшими составными частями живого организма, играют исключительно  важную роль в природе и человеческой жизнедеятельности. В настоящее время еще не существует способов синтеза углеводов, зато ежегодно образуется огромное количество естественных растительных полимеров, из которых эти продукты могут быть получены в результате гидролиза. Древесина, благодаря ее большим запасам и постоянному возобновлению, является уникальным источником углеводов [1].

Лох узколистный лекарственный – растение, включенное в большинство мировых фармакопей. Он широко используется в народной медицине при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, так как обладают вяжущим, противовоспалительным и обволакивающим действием. Их используют как отхаркивающее (при бронхитах), мочегонное (при отеках), как антигельминтное и витаминное средства. Настой плодов проявляет гипотензивный, а также легкий анальгезирующий эффекты. В Средней Азии из порошка околоплодника готовят детское питание. В иранской народной медицине плоды использовались как обезболивающее и противовоспалительное средство у пациентов с ревматоидным артритом, а также для ускорения процесса заживления ран [2].

В Армении из плодов лоха узколистного получен лекарственный препарат пшатин, являющийся концентратом полифенольных соединений, применяющийся при колитах и других заболеваниях пищеварительного тракта [3, 4].

Клетчатка плодов способствует выведению из организма токсичных веществ, избытка холестерина, тяжелых металлов, стимулирует процессы выделения желчи [5]. На основе масла семян лоха предложены составы мягких лекарственных форм, регенеративная и противовоспалительная активности которых экспериментально доказаны.

В настоящее время пристальное внимание в области фармации и медицины направлено на поиск новых источников биологически активных веществ различного происхождения, в том числе и растительного. В качестве перспективного источника рассматривается древесное растение Elaeagnus angustifolia.

Исходя из вышеизложенных, целю данной работы является углеводного изучение плодов лоха узколистного, произрастающего в различных климатических условиях Республики Узбекистан.

Экспериментальная часть

В связи с тем, что миграция различных химических составов из сырья в извлечения сильно различается и то, что полисахаридного состава плодов растении также влияют и климатические условии и вещественный состав почвы, были исследованы различные органы этих растений, в частности мякоть и кожура плодов. Объектом для исследования служили 12 сорта лоха: Ходжейли райони (№1); Нукус (№2); Нукус райони (№3); Самарқанд 7 форма (№4); Фарғона 6 форма (№5); Самарқанд 7,2 форма (№6); Тошкент 16 форма (№7); Сирдарё 8 форма (№8); Тошкент 22 форма (№9); Тошкент 11 форма (№10); Тошкент 2 форма (№11); Тошкент 17 форма (№12).

Испытания на содержание полисахаридов.

Для изучения углеводного состава, определение массовой доли сахарозы, глюкозы, фруктозы и сорбита проводилась методом ВЭЖХ с рефрактометрическим детектором.

Точная навеска около 2,5-3,0 гр, экстрагируют 100 мл дистиллированной воды с помощью магнитной мешалки при 35-40⁰С температуры в течение 3 часов. Затем экстракт с колбой помещают в ультразвуковую баню в течении 10 мин и после чего отфильтровывают через фильтр с диаметром пор 0,20 мкм (для нерастворимых в воде веществ) или с диаметром пор 0,45 мкм в виалы 1-1,5 см³ этого раствора. Сначала проводят определение количественного содержания растворов стандартных образцов сахарозы, глюкозы, фруктозы и мальтозы.

Приготовление стандартных градировочных растворов смеси сахаров (сахароза, глюкоза, фруктоза и мальтоза).

Стандартные градировочные растворы смеси сахаров (сахарозы, глюкозы, фруктозы и сорбита) готовят для одновременной градировочной зависимости по трем точкам, от большей массовой концентрации или массовой доли сахарозы, глюкозы, фруктозы и сорбита к меньшей на основе стандартного раствора N 1 в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1.

Приготовление стандартных градировочных растворов смеси сахаров (сахарозы, глюкозы, фруктозы и мальтозы)

Стандартные градировочные растворы смеси сахаров готовят непосредственно перед проведением измерений. Для приготовления градировочного раствора N 1 (основного) взвешивают точной навески по 2,0 г сахарозы, глюкозы, фруктозы и сорбита в мерной колбе с записью результата до четвертого знака после запятой, растворяют в 50 мл воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят водой до метки и перемешивают. Для приготовления градировочных растворов N 2 и 3 отбирают пипетками соответствующие аликвоты из градировочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 3, помещают их в мерные колбы и доводят водой до метки, тщательно перемешивая. Порядок элюирования сахаров и сорбита следующий: сахароза, глюкоза, фруктоза, сорбит.

Условия хроматографического анализа:

- Хроматограф Agilent 1260 Infinity (USA)

- Колонка аналитическая: Exlipse XDB. 8 mkm 4,6x250mm

- Элюент: раствор Са-ЭДТА 0,03-0,1 ммоль/дм³ 

- Температура колонки: 70°С - 90 °С 

- Детектирование: рефрактометрическое

 -Скорость потока подачи элюента: 1,0 см³/мин

 -Объем вводимой пробы 10 мкл

Анализ проб: Каждую пробу анализируют по три раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1 и ГОСТ ИСО 5725-2. Регистрируют площади пиков моносахаров. В случае если площадь соответствующего пика выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую менее или более разбавленную пробу и анализ повторяют.

Обработка и оформление результатов определения

Массовую концентрацию или массовую долю сахарозы, глюкозы, фруктозы и сорбита в пробе продукта рассчитывают раствором смеси cахаров (сахарозы, глюкозы, фруктозы или сорбита)

где: c(X)- массовая концентрация (массовая доля) сахарозы, глюкозы, фруктозы или сорбита в анализируемой пробе, г/дм3; Cст - массовая концентрация (массовая доля) сахарозы, глюкозы, фруктозы или сорбита в стандартном растворе, г/дм3; Sx- площадь пика анализируемого вещества, V2- вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, см3; Sст- площадь пика анализируемого сахара в стандартном растворе, V1- объем пробы, отобранный для измерения по 6.2.1-6.2.2, см ; mобщ- масса пробы после разбавления, г, m(x) - масса пробы до разбавления, г. Расхождение между параллельными определениями (в процентах от среднего значения)  не должно превышать ±2% предела повторяемости (сходимости %) при вероятности 0,95.

Результаты и их обсуждение

В составе полисахаридного комплекса плодов лоха идентифицированы глюкоза, манноза, галактоза, фруктоза, ксилоза и рамноза, R_f которых соответственно равны 0,18; 0,20; 0,21; 0,23; 0,25; 0,41 в системе бутанол-уксусная кислота-вода (Бумажная хроматография (БХ), 4:1:5). В системах растворителей этилацетат-муравьиная кислота-уксусная кислота-вода (18:1:4:3) и этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода (5:5:1:3) идентифицировали галактуроновую кислоту (БХ, R_f 0,271), содержание редуцирующих сахаров в плодах лоха узколистного составляет 50,67-55,75%, а общего сахара (сахарозы)-60,0±5,0%. Гравиметрическим методом было определено общее содержание пектинов (водорастворимых и нерастворимых в воде) в плодах лоха узколистного, которое составило 3,58±0,3%  [6].

Статистически достоверные результаты определения технологического выхода и физические свойства углеводных фракций представлены в табл.2. Полученные данные свидетельствуют о высоком содержании углеводов. Растворимость в воде этой фракции, как и водорастворимых углеводов, косвенно предполагает их высокую биологическую доступность в организме человека. Полисахариды лоха узколистного могут представлять интерес по аналогии с полисахаридами алтея, льна, солодки, подорожника, обусловливающими отхаркивающее и противовоспалительное действие соответствующих лекарственных препаратов [7].

Таблица 2.

Количественное определение содержания моносахаридов плодов лоха узколистого методом ВЭЖХ с рефрактометрическим детектором