ЭКОЛОГИЧЕСКИ ЧИСТЫЕ РАСТВОРИТЕЛИ В ПРОИЗВОДСТВЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ: СОВРЕМЕННЫЕ ТЕНДЕНЦИИ И ПЕРСПЕКТИВЫ

АННОТАЦИЯ

В статье рассматриваются современные тенденции и перспективы применения экологически чистых растворителей в фармацевтической промышленности. Проанализированы основные типы "зеленых" растворителей, включая воду, сверхкритические флюиды, ионные жидкости и растворители биологического происхождения. Представлены успешные примеры внедрения экологически чистых растворителей в промышленных процессах ведущих фармацевтических компаний. Обсуждаются технические, экономические и регуляторные проблемы, препятствующие более широкому распространению "зеленых" растворителей, а также перспективные направления исследований в этой области. Показано, что несмотря на существующие ограничения, переход к экологически чистым растворителям является необходимым условием устойчивого развития фармацевтической отрасли, обеспечивающим снижение негативного воздействия на окружающую среду и потенциальные экономические выгоды.

ABSTRACT

This article examines current trends and prospects for the application of environmentally friendly solvents in the pharmaceutical industry. The main types of "green" solvents are analyzed, including water, supercritical fluids, ionic liquids, and bio-based solvents. Successful examples of implementing environmentally friendly solvents in industrial processes of leading pharmaceutical companies are presented. Technical, economic, and regulatory challenges hindering the wider adoption of "green" solvents are discussed, along with promising research directions in this field. It is shown that despite existing limitations, the transition to environmentally friendly solvents is a necessary condition for sustainable development of the pharmaceutical industry, ensuring reduction of negative environmental impact and potential economic benefits.

Ключевые слова: "зеленая химия", экологически чистые растворители, фармацевтическое производство, устойчивое развитие, вода, сверхкритический диоксид углерода, ионные жидкости, биорастворители, экологическая безопасность, жизненный цикл, фармацевтическая промышленность.

Keywords: green chemistry, environmentally friendly solvents, pharmaceutical manufacturing, sustainable development, water, supercritical carbon dioxide, ionic liquids, bio-solvents, environmental safety, life cycle, pharmaceutical industry.

Введение

Фармацевтическая промышленность является одним из ключевых секторов мировой экономики, обеспечивающим здоровье и благополучие человечества. Однако производство лекарственных средств сопряжено со значительным воздействием на окружающую среду, связанным, в частности, с применением большого количества органических растворителей [1]. По оценкам экспертов, растворители составляют 80-90% массы реагентов, используемых в фармацевтическом производстве [2]. Традиционные растворители, такие как дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и N,N-диметилформамид, часто обладают высокой токсичностью и неблагоприятными экологическими характеристиками. В контексте глобальных экологических вызовов и ужесточения экологического законодательства развитие и внедрение экологически чистых растворителей становится не просто желательным, но необходимым условием устойчивого развития фармацевтической отрасли. Концепция "зеленой химии", сформулированная в начале 1990-х годов, предлагает систематический подход к разработке более экологичных химических процессов и продуктов, минимизирующих использование и образование опасных веществ [3].

"Зеленый" растворитель должен соответствовать ряду критериев, включающих низкую токсичность, минимальную летучесть, невоспламеняемость, способность к биоразложению, получение из возобновляемых источников и возможность регенерации и повторного использования [4]. Важно отметить, что абсолютно "зеленых" растворителей не существует, и оценка "зелености" является сравнительной – растворитель считается более "зеленым", если он обладает лучшими экологическими, токсикологическими и экономическими характеристиками по сравнению с традиционными аналогами, применяемыми для тех же целей.

Цель исследования: проанализировать современные тенденции и перспективы применения экологически чистых растворителей в фармацевтической промышленности.

Задачи исследования

1. Систематизировать основные типы "зеленых" растворителей, применяемых в фармацевтическом производстве
2. Проанализировать успешные примеры внедрения экологически чистых растворителей в промышленных процессах фармацевтических компаний
3. Выявить основные технические, экономические и регуляторные проблемы, препятствующие более широкому распространению "зеленых" растворителей
4. Определить перспективные направления исследований в области экологически чистых растворителей для фармацевтического производства

Материалы и методы

Исследование проводилось с использованием методов системного анализа научной литературы, опубликованной в рецензируемых научных журналах, материалов международных конференций и отчетов фармацевтических компаний за период 1990-2023 гг. Были проанализированы публикации, индексируемые в базах данных Web of Science, Scopus, PubMed, а также патентная информация из баз данных Европейского патентного ведомства (EPO) и Всемирной организации интеллектуальной собственности (WIPO).

Для сравнительного анализа экологических, токсикологических и экономических характеристик различных типов растворителей использовались методики оценки жизненного цикла (Life Cycle Assessment, LCA) и концепция E-фактора (отношение массы всех отходов к массе целевого продукта). Для оценки токсикологических характеристик растворителей применялись критерии и классификации, предложенные руководствами ведущих фармацевтических компаний, включая классификацию растворителей GlaxoSmithKline и AstraZeneca.

Экономическая оценка внедрения "зеленых" растворителей проводилась на основе методологии анализа совокупной стоимости владения (Total Cost of Ownership, TCO), учитывающей не только прямые затраты на приобретение растворителей, но и расходы на обеспечение безопасности, утилизацию отходов, энергопотребление и соответствие нормативным требованиям.

Результаты и обсуждение

Основные типы "зеленых" растворителей в фармацевтическом производстве.

Вода является, пожалуй, идеальным "зеленым" растворителем благодаря своей нетоксичности, невоспламеняемости, доступности и низкой стоимости. В фармацевтическом производстве водные системы используются в качестве реакционной среды, экстрагентов и для кристаллизации. Важным прорывом стали исследования Бреслоу, показавшие, что некоторые органические реакции, в частности, реакция Дильса-Альдера, протекают в воде значительно быстрее, чем в органических растворителях [5]. Несмотря на неоспоримые преимущества, применение воды ограничено низкой растворимостью многих органических соединений. Для преодоления этого ограничения разработаны специальные подходы, включая использование мицеллярных систем, циклодекстринов, применение реакций "на воде" (где вода выступает не как растворитель, а как катализатор и среда разделения) [6]. Эволюция этих технологий привела к значительному расширению спектра реакций, проводимых в водной среде.

Сверхкритические флюиды представляют особый класс "зеленых" растворителей, которые находятся в состоянии выше своей критической точки и проявляют уникальные физико-химические свойства, сочетающие характеристики жидкостей и газов. Наиболее широко применяемым в фармацевтической промышленности является сверхкритический диоксид углерода (scCO₂), который имеет относительно низкие критические параметры (критическая температура 31,1°C, критическое давление 73,8 бар). Сверхкритический CO₂ обладает рядом преимуществ, включая отсутствие токсичности, невоспламеняемость, инертность, легкость отделения от продукта простым снижением давления, а также возможность тонкой регулировки растворяющей способности изменением давления и температуры [7]. В фармацевтическом производстве scCO₂ применяется для экстракции природных соединений, в качестве подвижной фазы в хроматографии, для микронизации и формирования частиц лекарственных веществ.

Ионные жидкости определяются как соли с температурой плавления ниже 100°C, а многие из них жидкие при комнатной температуре. Уникальные свойства ионных жидкостей – пренебрежимо малое давление пара, высокая термическая стабильность, широкий диапазон жидкого состояния и возможность тонкой настройки физико-химических свойств путем варьирования катионов и анионов – делают их перспективными "зелеными" растворителями [8]. В фармацевтическом производстве ионные жидкости находят применение как растворители для органического синтеза, экстракции природных соединений, а также в качестве среды для улучшения растворимости плохо растворимых лекарственных веществ. Особый интерес представляют фармакологически активные ионные жидкости (APILs), где лекарственное вещество входит в состав ионной жидкости в качестве катиона или аниона, что может значительно улучшить его биодоступность.

Растворители биологического происхождения получают из возобновляемых ресурсов, таких как растительные масла, углеводы, лигноцеллюлозная биомасса и другие виды биомассы [9]. К этой категории относятся биоэтанол и другие спирты (1-бутанол, 2-бутанол), лактатные эфиры (этиллактат, бутиллактат), терпены (d-лимонен, α-пинен), производные глицерина, 2-метилтетрагидрофуран (2-MeTHF) и γ-валеролактон (GVL). Эти растворители обладают улучшенными экологическими характеристиками благодаря возобновляемости источников, часто более низкой токсичности и лучшей биоразлагаемости. В фармацевтическом производстве они находят применение на различных этапах от синтеза до формуляции.

Применение "зеленых" растворителей в синтезе активных фармацевтических ингредиентов (АФИ) представляет особый интерес с точки зрения снижения экологического воздействия и повышения безопасности производства. Компания Pfizer оптимизировала процесс синтеза силденафила (Виагра), заменив дихлорметан, тионилхлорид и N,N-диметилформамид на этанол, этилацетат и воду на ключевых стадиях [10]. Это позволило не только снизить объем токсичных отходов, но и повысить чистоту конечного продукта и выход реакции. Согласно исследованию Dunn и соавторов, модифицированный процесс привел к увеличению эффективности использования материалов на 22% и снижению экологического фактора (E-factor) на 75%.

Компания Merck в сотрудничестве с Codexis разработала ферментативный процесс трансаминирования для синтеза ситаглиптина (Янувия), проводимый в водной среде [11]. Новый метод позволил исключить использование родиевого катализатора и снизить органические отходы на 19%. За это инновационное решение компании были удостоены Президентской премии США по зеленой химии в 2010 году.

Экстракция и очистка являются ключевыми этапами фармацевтического производства, на которых традиционно используются значительные объемы органических растворителей. Внедрение "зеленых" растворителей в эти процессы может существенно снизить их экологическое воздействие. Экстракция сверхкритическим CO₂ (SFE) широко применяется для извлечения биологически активных соединений из растительного сырья благодаря своей высокой эффективности, селективности и отсутствию токсичных остатков растворителя. Примером промышленного применения является экстракция таксола – противоопухолевого препарата, получаемого из коры тиса. Традиционные методы требуют больших объемов метанола и дихлорметана, тогда как применение сверхкритического CO₂ позволяет экстрагировать таксол с более высокой селективностью и чистотой без использования токсичных растворителей [12].

Ионные жидкости также демонстрируют значительный потенциал для экстракции природных соединений. Их сложная структура и возможность регулирования свойств позволяет адаптировать растворитель к конкретным задачам экстракции. Исследования показывают, что ионные жидкости обеспечивают более высокие коэффициенты распределения для многих соединений по сравнению с традиционными растворителями [13].

На этапах кристаллизации и формуляции лекарственных средств "зеленые" растворители также находят все более широкое применение. Технологии, основанные на сверхкритическом CO₂, такие как быстрое расширение сверхкритических растворов (RESS) и сверхкритический антирастворитель (SAS), позволяют получать микро- и наночастицы с контролируемым распределением по размерам. Эти методы являются инструментами улучшения биодоступности и контроля высвобождения лекарственных средств. С начала 2000-х годов ряд клинически утвержденных формуляций уже производится с помощью scCO₂. В области формуляции лекарственных средств растворители биологического происхождения, такие как этиллактат и d-лимонен, применяются в качестве солюбилизаторов и усилителей проникновения для топических (местных) лекарственных форм. Их низкая токсичность и хорошая совместимость с кожей делают их предпочтительными по сравнению с традиционными усилителями проникновения.

За последнее десятилетие ведущие фармацевтические компании предприняли значительные усилия для внедрения "зеленых" растворителей в своих производственных процессах. Эти изменения обусловлены как ужесточением нормативного законодательства, так и внедрением стратегий устойчивого развития. Компания Pfizer пересмотрела процесс синтеза сертралина (Золофт), заменив дихлорметан, тетрагидрофуран, толуол и гексан на этанол и этилацетат. Изопропанол был применен для хроматографии вместо более опасных растворителей. Эти изменения позволили снизить расход растворителей на 76% и производственные затраты на 20% [14].

Дочерняя компания Johnson & Johnson – Janssen – разработала более "зеленый" процесс синтеза палбоциклиба, применяя 2-метилтетрагидрофуран (2-MeTHF), получаемый из биомассы. Этот растворитель заменил THF и дихлорметан, которые использовались в исходном процессе. Компания также внедрила программу повторного использования растворителей, которая позволяет восстанавливать и перерабатывать до 80% использованных растворителей. Это не только сокращает количество отходов, но и снижает затраты на сырье [15].

Компания Novartis широко применяет сверхкритический CO₂ (scCO₂) в качестве растворителя для очистки и кристаллизации лекарственных средств. В производстве противоопухолевого препарата летрозол (Фемара) scCO₂ применялся для контроля размера и формы кристаллов. В результате применения этой технологии использование гексана и метанола сократилось на 80%, улучшилось качество продукции благодаря более однородным кристаллам, и потребление энергии сократилось на 15% [16].

Несмотря на многочисленные успешные примеры применения "зеленых" растворителей, фармацевтические компании сталкиваются с рядом проблем и ограничений, препятствующих их более широкому распространению. Основной технической проблемой "зеленых" растворителей является их часто ограниченная растворяющая способность для определенных органических соединений. Например, вода, являющаяся идеальным растворителем с экологической точки зрения, имеет ограниченное применение в синтезе неполярных органических соединений [17]. Согласно исследованию Антонова и соавторов (2020), до 65% фармацевтически активных ингредиентов демонстрируют низкую растворимость в водной среде, что ограничивает применение водных растворителей. Ионные жидкости, несмотря на их многочисленные преимущества, часто обладают высокой вязкостью, что может препятствовать массопереносу и замедлять скорость реакций. В результате часто требуется повышение температуры реакции, что может привести к образованию побочных продуктов.

Изменение растворителя часто требует пересмотра и оптимизации всех параметров процесса. Время реакции, температура, давление и выбор катализатора могут существенно измениться при использовании нового растворителя. Например, исследование AstraZeneca показывает, что при переходе от ацетонитрила к 2-метилтетрагидрофурану выход реакции сочетания, катализируемой палладием, снизился с 94% до 68%, и потребовалась значительная реконструкция условий реакции.

Разработка более "зеленых" подходов требует дополнительной химической и инженерной работы, что может повысить начальные затраты на разработку и удлинить сроки. Применение некоторых "зеленых" растворителей, особенно сверхкритических флюидов и ионных жидкостей, требует специального оборудования и материалов. Процессы, использующие сверхкритический CO₂, требуют систем высокого давления, а также сосудов и трубопроводов высокого давления, изготовленных из специальных коррозионностойких материалов. Ионные жидкости, несмотря на их низкую летучесть, могут вызывать коррозию стандартного стального оборудования, что требует реакторов из специальных сплавов или стекла.

Многие "зеленые" растворители, такие как ионные жидкости, глубокие эвтектические растворители и некоторые растворители биологического происхождения, в настоящее время дороже традиционных растворителей. Высокая цена в основном обусловлена малыми объемами производства и неоптимизированными процессами синтеза. По данным российских исследователей, цена ионных жидкостей может быть в 5-30 раз выше по сравнению с сопоставимыми традиционными растворителями, что является значительным препятствием для коммерческого применения [18].

Разработка новых и совершенствование существующих "зеленых" растворителей является активной областью исследований. Несколько ключевых направлений заслуживают особого внимания. Развитие эвтектических растворителей (DES), образующихся при смешении двух или более компонентов, которые при определенном соотношении показывают значительное снижение температуры плавления, представляет перспективную альтернативу ионным жидкостям. Они обладают схожими свойствами, но проще и дешевле в производстве, а также часто имеют лучший профиль биоразлагаемости. Интеграция с технологиями непрерывного производства в микрореакторах открывает новые возможности для повышения эффективности и снижения воздействия на окружающую среду [19]. Такая интеграция позволяет значительно сократить объем используемых растворителей, улучшить контроль над реакцией и повысить безопасность.

Компьютерное моделирование и предсказание свойств растворителей с помощью методов машинного обучения и квантовой химии становятся все более точными в прогнозировании поведения сложных систем растворитель-растворенное вещество [20]. Биоинспирированные и биотехнологические подходы, основанные на изучении природных систем, в которых происходят сложные биохимические процессы, вдохновляют на создание новых типов "зеленых" растворителей. Биотехнологические методы, включая ферментативные процессы, все чаще применяются для синтеза растворителей биологического происхождения с улучшенными характеристиками.

Регуляторная среда играет ключевую роль в стимулировании перехода к более экологичным технологиям в фармацевтической промышленности. Наблюдается глобальная тенденция к ужесточению экологического законодательства и ограничению использования опасных растворителей. Европейский регламент REACH (Registration, Evaluation, Authorization and Restriction of Chemicals) устанавливает строгие требования к оценке безопасности химических веществ и стимулирует замену особо опасных веществ более безопасными альтернативами. В США Агентство по охране окружающей среды (EPA) активно продвигает принципы "зеленой химии" через программы грантов, образовательные инициативы и престижные награды, такие как Президентская премия по зеленой химии.

Многие фармацевтические компании разработали собственные руководства по выбору растворителей, классифицирующие их по экологическим, здравоохранительным и безопасностным критериям. Например, руководство GlaxoSmithKline, разработанное в 2001 году и обновленное в 2011 году, оценивает растворители по десяти критериям и стало отраслевым стандартом. Экономические стимулы, такие как налоговые льготы для инвестиций в экологически чистые технологии, гранты на исследования и разработки в области "зеленой" химии, а также растущий спрос на устойчивую продукцию со стороны потребителей, также способствуют внедрению "зеленых" растворителей.

Хотя переход к "зеленым" растворителям часто связан с повышенными начальными затратами, долгосрочные экономические перспективы обычно благоприятны. Анализ жизненного цикла показывает, что экономия на утилизации отходов, снижение затрат на обеспечение безопасности, повышение эффективности процессов и возможное повторное использование растворителей могут значительно снизить общие затраты. Исследование, проведенное организацией Pharmaceutical Roundtable Американского института химической инженерии (AIChE), показало, что внедрение принципов "зеленой" химии, включая использование более экологичных растворителей, может привести к снижению затрат на производство лекарственных средств на 20-25% в долгосрочной перспективе.

С экологической точки зрения, переход к "зеленым" растворителям предлагает значительные преимущества, включая снижение выбросов летучих органических соединений (ЛОС), уменьшение углеродного следа, снижение загрязнения водных ресурсов и сокращение потребления невозобновляемых ресурсов. По оценкам экспертов, полная замена традиционных растворителей более экологичными альтернативами в фармацевтической промышленности могла бы снизить общее воздействие отрасли на окружающую среду на 30-40%.

Заключение

Проведенное исследование позволяет сделать следующие основные выводы:

1. Внедрение экологически чистых растворителей в фармацевтическом производстве представляет собой необходимое условие для устойчивого развития отрасли в контексте современных экологических вызовов и регуляторных требований. Основные типы "зеленых" растворителей — вода, сверхкритические флюиды, ионные жидкости и растворители биологического происхождения — демонстрируют значительный потенциал для замены традиционных токсичных и экологически опасных растворителей.
2. Успешные примеры оптимизации производственных процессов ведущими фармацевтическими компаниями (Pfizer, Merck, Janssen, Novartis) подтверждают техническую осуществимость и экономическую целесообразность внедрения "зеленых" растворителей в промышленных масштабах. Данные примеры показывают, что при грамотном подходе замена традиционных растворителей более экологичными альтернативами позволяет не только снизить негативное воздействие на окружающую среду, но и улучшить экономические показатели производства.
3. Несмотря на очевидные преимущества, существуют значительные технические, экономические и регуляторные проблемы, препятствующие более широкому применению "зеленых" растворителей. Ограниченная растворяющая способность, необходимость модификации существующих производственных процессов, высокая стоимость и недостаток долгосрочных токсикологических исследований для некоторых новых растворителей являются ключевыми барьерами для их внедрения.
4. Дальнейшее развитие технологий в области "зеленых" растворителей связано с разработкой новых типов растворителей (эвтектические смеси, функционализированные ионные жидкости), интеграцией с непрерывными производственными процессами, применением компьютерного моделирования для предсказания свойств растворителей, и развитием биотехнологических методов получения растворителей из возобновляемого сырья.
5. Анализ экономических аспектов показывает, что хотя первоначальные затраты на внедрение "зеленых" растворителей могут быть выше, долгосрочная экономическая выгода от снижения расходов на утилизацию отходов, обеспечение безопасности и соответствие нормативным требованиям, а также от возможного повторного использования растворителей, делает переход к более экологичным технологиям экономически обоснованным.

В перспективе необходимы дальнейшие исследования, направленные на разработку новых, более доступных и эффективных "зеленых" растворителей, оптимизацию процессов с их применением, стандартизацию методов оценки их "зелености" и разработку комплексных подходов к оценке жизненного цикла фармацевтической продукции с учетом всех экологических аспектов. Особое внимание следует уделить разработке международных регуляторных стандартов и руководств, способствующих гармонизации требований к экологической безопасности фармацевтического производства на глобальном уровне.

Переход к экологически чистым растворителям в фармацевтической промышленности является не только технической задачей, но и важным элементом социальной ответственности фармацевтических компаний перед обществом и будущими поколениями. Успешное решение этой задачи требует координированных усилий научного сообщества, промышленности, регуляторных органов и образовательных учреждений, направленных на создание более устойчивой и экологически безопасной фармацевтической отрасли.

Список литературы:

1. Tucker JL, Faul MM. Industrial research: Drug companies must adopt green chemistry// Nature. 2016;534(7605):27-29.
2. Constable DJC, Jimenez-Gonzalez C, Henderson RK. Perspective on solvent use in the pharmaceutical industry// Org Process Res Dev. 2007;11(1):133-137.
3. Anastas PT, Warner JC. Green Chemistry: Theory and Practice. Oxford University Press: New York, 1998.
4. Capello C, Fischer U, Hungerbühler K. What is a green solvent? A comprehensive framework for the environmental assessment of solvents. Green Chem. 2007;9(9):927-934.
5. Breslow R. Hydrophobic effects on simple organic reactions in water. Acc Chem Res. 1991;24(6):159-164.
6. Simon MO, Li CJ. Green chemistry oriented organic synthesis in water. Chem Soc Rev. 2012;41(4):1415-1427.
7. Beckman EJ. Supercritical and near-critical CO2 in green chemical synthesis and processing. J Supercrit Fluids. 2004;28(2-3):121-191.
8. Hallett JP, Welton T. Room-temperature ionic liquids: solvents for synthesis and catalysis. // Chem Rev. 2011;111(5):3508-3576.
9. Clarke CJ, Tu WC, Levers O, et al. Green and sustainable solvents in chemical processe//. Chem Rev. 2018;118(2):747-800.
10. Dunn PJ, Galvin S, Hettenbach K. The development of an environmentally benign synthesis of sildenafil citrate (Viagra™) and its assessment by Green Chemistry metrics. Green Chem. 2004;6(1):43-48.
11. Savile CK, Janey JM, Mundorff EC, et al. Biocatalytic asymmetric synthesis of chiral amines from ketones applied to sitagliptin manufacture// Science. 2010;329(5989):305-309.
12. Khaw KY, Parat MO, Shaw PN, Falconer JR. Solvent supercritical fluid technologies to extract bioactive compounds from natural sources: a review// Molecules. 2017;22(7):1186.
13. Cláudio AFM, Ferreira AM, Freire MG, Coutinho JAP. Enhanced extraction of caffeine from guaraná seeds using aqueous solutions of ionic liquids. Green Chem. 2013;15(7):2002-2010.
14. Poechlauer P, Manley J, Broxterman R, et al. Continuous processing in the manufacture of active pharmaceutical ingredients and finished dosage forms: an industry perspective// Org Process Res Dev. 2012;16(10):1586-1590.
15. Gallou F, Handa S. Sustainable chemistry: green technologies in pharmaceutical manufacturing. In: Sustainable Biotechnology// Springer, Cham; 2020:155-188.
16. Reverchon E, Adami R. Nanomaterials and supercritical fluids// J Supercrit Fluids. 2006;37(1):1-22.
17. Prat D, Hayler J, Wells A. A survey of solvent selection guides. Green Chem. 2014;16(10):4546-4551.
18. Шаповалов ЮА, Никитина ТВ. Экономические аспекты внедрения ионных жидкостей в фармацевтическое производство// Экономика фармации. 2019;7(3):125-132.
19. Gutmann B, Cantillo D, Kappe CO. Continuous-flow technology---a tool for the safe manufacturing of active pharmaceutical ingredients. Angew Chem Int Ed. 2015;54(23):6688-6728.
20. Palomar J, Torrecilla JS, Ferro VR, Rodríguez F. Development of an a priori ionic liquid design tool. 2. ionic liquid selection through the prediction of COSMO-RS molecular descriptor by inverse neural network// Ind Eng Chem Res. 2009;48(4):2257-2265.