МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ТРАМАДОЛА В СУДЕБНО-ХИМИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕТОДОВ ВЭЖХ-МС

АННОТАЦИЯ

В работе представлены результаты по вопросам идентификации психоактивного вещества трамадола в изъятых из незаконного оборота препаратах, потенциально содержащих запрещённые вещества. В работе, для идентификации трамадола в изъятых из незаконного оборота препаратах, потенциально содержащих запрещённые вещества, был использован метод ВЭЖХ-МС. Установлено, что при его проведении оптимальным режимом ионизации, является режим положительной ионизации, который позволяет получить молекулярный ион, что значительно облегчает идентификацию данных веществ при анализе неизвестных смесей.

ABSTRACT

The paper presents results on the identification of the psychoactive substance tramadol in drugs seized from illicit circulation that potentially contain prohibited substances. In this work, the HPLC-MS method was used to identify tramadol in drugs seized from illicit trafficking that potentially contained prohibited substances. It has been established that when it is carried out, the optimalionization mode is the positiveionization mode, which allows one to obtain a molecular ion, which greatly facilitates the identification of these substances when analyzing unknown mixtures.

Ключевые слова: психотропные вещества, идентификационные показатели, психоактивные вещества, судебно-химический анализ, незаконный оборот, аптечные наркотики, обезболивающие препараты

Keywords: psychotropic substances, identification indicators, psychoactive substances, forensic chemical analysis, illegal trafficking, pharmaceutical drugs, painkillers

Трамадол (Трамал) – это обезболивающий препарат опиоидной группы, который применяется для устранения умеренной или сильной боли. Врачи часто выписывают его пациентам с онкологией.

В больших дозах медикамент вызывает наркотическое опьянение. Если принимать его регулярно, то высока вероятность развития физической и психологической зависимости. Длительный прием вещества приводит к разрушению психики и поражению внутренних органов. [1-3]

Препарат Трамадол впервые был синтезирован немцем Куртом Фликом в 1962 г. Патент на медикамент был выдан в 1972 г., спустя пять лет вещество появилось на фармакологическом рынке. Препарат признали эффективным анальгетиком, сравнивая его с морфином. Вещество обладает схожим действием, блокируя μ-опиоидные рецепторы, которые отвечают за передачу болевых импульсов. При его употреблении у пациента высвобождаются молекулы О-десметилтрамадола, которые и оказывают наркотическое воздействие, вызывая сильную зависимость. [4, 7- 8]

Трамадол широко используется в медицине для терапии умеренных и хронических болей, при онкологии и облегчения состояния пациентов после хирургического вмешательства. Выпускается в таблетках или ампулах. Подпольно вещество не синтезируется из-за технических сложностей. [5, 10] Поскольку вещество относится к анальгетикам, оно обладает сильнейшим обезболивающим эффектом и начинает действовать практически сразу после первого приема. Опиоидный анальгетик вызывает следующие изменения у зависимого отмечаются такие симптомы, как замедляется дыхание, улучшается настроение, устраняются болевые ощущения, замедляется сердцебиение. Кроме того, у наркомана нарушается координация движений, все его действия становятся заторможенными. Важно отметить, что Трамадол вызывает краткосрочную эйфорию, за которую приходится платить серьезными проблемами со здоровьем и развитием необратимых отклонений. [4, 6]Неудивительно, что новость о психотропном воздействии данного препарата, очень схожего с успокаивающим и эйфоризирующим эффектом морфина и других опиатов, после запрета «Трамадола», «Залдиара», «Коаксила», ужесточения рецептурного отпуска комбинированных кодеиносодержащих препаратов быстро облетела круги любителей психоактивных веществ и они переключились на его активное потребление. Препарат стал стремительно набирать популярность в «наркоманских» кругах [3, 9-11].

Учитывая вышеизложенное, целью настоящего исследования являлось разработка высокочувствительной, воспроизводимой методики количественного определения трамадола в изъятых образцах методом ВЭЖХ–МС, и апробирование данной методики в практике судебно-химических исследований.

Методы. ВЭЖХ-МС (LC/MS) проводили на приборе Agilent Technologist 1100 серии с использованием, диодноматричного детектора DAD и масс-спектрометрического детектора. Разделение проводили в изократическом режиме с использованием в качестве подвижной фазы - ацетонитрила. Колонка Zorbax Agilent Eclipse XDB-C8,  125x2 mm, 5 μm; скорость потока 0,5 мл/мин, температура колонки 300С; объем инъекции- 5 мкл, время анализа 15 мин, длина волны 230 нм, источник- электро-спрей-ионизация при атмосферном давлении (AP-ESI); анализ проводился в режимах: положительная (сигнал 1) и отрицательная (сигнал 2) ионизация; температура газа 2500С; температура испарителя 2000С; скорость газа 12 л/мин, давление газа 35 рci, напряжение 3000 В, напряжение заряда 2000 В; ток -4 мА; диапазон сканирования от 100 до 1000 m/z. Хроматограммы, УФ-спектры и масс-спектры исследуемых синтетических наркотических средств приведены в приложении. Для идентификации соединений использовалась информация об их времени удерживания, максимумах светопоглощения в УФ-области спектра и масс-спектры.

Рисунок 1. ВЭЖХ- хроматограмма трамадола при длине волны 230 нм.

На хроматограмме (рис. 1) трамадола было выявлено наличие нескольких пиков со временем удерживания от 2- 5,8мин. При этом пик, со временем удерживания 5,6 мин соответствовал действующему веществу- трамадолу, остальные пики, соответствовали сопутствующим веществам.

Рисунок 2. УФ- спектр трамадола при времени удерживания 5,4 мин.

На Уф-спектре трамадола было выявлено два максимума поглощения  при  220 и 270 нм (рис. 2).

На рис.3. приводится масс- спектр трамадола, на котором наблюдается присутствие протонированного молекулярного иона (М+264) с фрагментарными ионами с m/z 265, 171.

Рисунок 3. Масс-спектр трамадола при положительном режиме ионизации

В табл. 1, 2 представлены данные, согласно которым, наличие молекулярного иона М+ как в режиме положительной, так и отрицательной ионизации свидетельствуют об успешном использовании разработанной методики для идентификации данного вида психотропных веществ как в составе лекарственных препаратов при выявлении их фальсификатов, так и при анализе многокомпонентных смесей.

Таблица 1.

Основные спектральные характеристики анализируемых психотропных веществ

Таблица 2.

Основные масс-спектрометрические характеристики трамадола, полученные методом ВЭЖХ-МС

Результаты статистической обработки валидационной характеристики разработанной комплексной методики определения количественного содержания трамадолав изъятых из незаконного оборота препаратов, потенциально содержащих запрещённые вещества, представлены в табл.3.Содержание действующих веществ в исследуемых образцах проводили путем построения калибровочных графиков стандартных растворов, а также на основе расчета площади пика стандартных растворов и площади пика растворов исследуемого вещества в пересчете на сухое вещество.Статистическую обработку полученных результатов проводили согласно общепринятым статистическим критериям, используя программное обеспечение Microsoft Еxcel.

Результаты статистической обработки количественного содержания действующих веществ в исследуемых препаратах представлено в табл.3.

Таблица 3.

Статистические параметры расчета содержания препарата «Трамадол» (50 мг/табл)

Согласно  требованиям Фармакопеи, точность результатов анализа, должна быть такова, чтобы доверительные пределы при Р=95% отклонялись от среднего значения не более, чем на ±5%, в нашем случае,   во всех случаях относительная точность результатов испытаний (ε) меньше 5%, следовательно, все определения выполнены с требуемой точностью.

Валидация методик проводилась путём сравнения результатов с традиционными методиками анализа растворов. Высокая согласованность между значениями, полученными при анализе прегабалина и трамадола, в исследуемых объектах, свидетельствует о пригодности разработанных методик качественного и количественного анализа для рутинных экспертных исследований. Полученные метрологические характеристики, подтверждают надёжность разработанных методик, а также их соответствие требованиям, предъявленным к методам анализа данной категории веществ.

Выводы. Таким образом, как показывают результаты проведённых исследований, оптимальным режимом ионизации для идентификации трамадола в изъятых из незаконного оборота препаратах, потенциально содержащих запрещённые вещества, является режим положительной ионизации, который позволяет получить молекулярный ион, что значительно облегчает идентификацию данных веществ при анализе неизвестных смесей.

Учитывая правовую точку зрения, в Республике Узбекистан торговля сильнодействующими лекарствами без рецепта признана уголовным преступлением. За незаконную реализацию «аптечных наркотиков», предусмотрено до пяти лет лишения свободы. Согласно основным положениям ст. 186-3 УК Республики Узбекистан, в части, касающейся, производства, изготовления, приобретения, хранения, перевозки в целях сбыта или сбыт недоброкачественных либо фальсифицированных лекарственных средств или изделий медицинского назначения, а также реализация лекарственных средств вне аптек и их филиалов, предусмотрено назначение штрафа в размере от 100 до 300 базовых расчетных величин (БРВ) — 22-67 млн сумов ($2200-6600), или принудительные работы до трех лет, или ограничение свободы от двух до пяти лет, или лишение свободы до пяти лет.

Список литературы:

1. Вельтищев Д.Ю., Марченко А.С. Генерализованное тревожное расстройство: проблемы диагностики, прогноза и психофармакотерапии. // Современная терапия психических расстройств. – 2013. – №1. – С. 29-35
2. Helander A, Backberg M, Beck O. MT-45, a new psychoactive substance associated with hearing loss and unconsciousness. Clin Toxicol 2014; 52:901–4.
3. Morris H, Wallach J. From PCP to MXE: a comprehensive review of the non-medical use of dissociative drugs. DrugTestAnal 2014; 6:614–32.
4. Тетенова Е.Ю., Надеждин А.В. Теория и практика интернет-консультирования лиц, связанных с проблемой злоупотребления наркотическими средствами и психотропными веществами // Наркология. – 2008. – № 10. – С. 35 – 41.
5. Пулатова Л.Т., Жалилов Ф.С. Практическое использование физико-химических методов анализа для качественного и количественного определения синтетических каннабиноидов «спайсов» и антидепрессантов (monography) // LAP LAMBERT Academic Publishing/ ISBN 978-613-7-38299-8. – 2018. – Maurituus. – 140 c.
6. Пулатова Л.Т., Кораблева Н.В., Узаков У.Х., Муратова Ш.Н. Разработка комплексного подхода идентификации лекарственных препаратов и синтетических каннабиноидов «спайсов» на основе применения современных аналитических методов анализа // – Монография. – Т. – 2018. – 136 с.
7. Pulatova L.T., Arypova T.U., Polyarush S.V., Iskandarov A.I., Tashmuhamedova Sh.S. Development of improved methods of thin-layer chromatography at exspertise of paroxetin // J. Europen science review. – № 7 (8). – 2018. – P. 322 – 331.
8. Pulatova L.T., Iskandarov A.I., Aripova T.U., Polyarush S.V., Sirov V.N. Development of improved methods of thin-layer chromatography and UV-spectrophotometry at expertise of paroxetin // J. Europer Science Review. – № 7 (8). – 2018. – Р. 303 – 309.
9. 9.Пулатова Л.Т., Искандаров А.И. Роль экспертных исследований при идентификации и анализе синтетических каннабиноидов спайсов в изъятых материалах. - TheScientificHeritage. – 2022. - №104. - С. 94 – 99.
10. Пулатова Л.Т., Искандаров А.И. Современные возможности экспертных иследований в отношении наркотических средств, прекурсоров и их структурных аналогов.  – The Scientific Heritage. – 2022. - № 104. – С. 88 – 94.
11. Пулатова Л.Т.,Жалилов Ф.С., Хакимова Ф.А. Выявление фальсифицированных лекарственных препаратов с использованием хроматографических методов в режиме on-line при проведении таможенной экспертизы. – Фармацевтический журнал. – Т. – 2018. - №2. – С. 60 – 65.
12. Alikhodjaeva M., Atahanov A., Xamdamov M. Development of Methodology for the Isolation and Determination of Propafenone in Blood Samples via HPLC // Journal of US-China Medical Science. – 2015. – Т. 12. – С. 163-171.