ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕКОТОРЫХ АНТИАРИТМИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ МЕТОДАМИ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО СКРИНИНГА

АННОТАЦИЯ

Антиаритмические лекарственные средства (ЛС) – это препараты, которые нормализируют нарушенный ритм сердечной деятельности. В ряде случаев возникает необхо­димость в комбинировании антиаритмических ЛС различных клас­сов, в том числе при резистентных формах нарушений ритма. Разработаны методики определения антиаритмических ЛС методами тонкослойной хроматографии, подобраны оптимальные условия для хроматографического скрининга амиодарона, аллапинина, атенолола, пропафенона и этацизина для определения их в биологических жидкостях.

ABSTRACT

Antiarrhythmic drugs (medicines) are drugs that normalize the disturbed rhythm of cardiac activity. In some cases, it becomes necessary to combine antiarrhythmic drugs of various classes, including in resistant forms of rhythm disorders. Methods for the determination of antiarrhythmic drugs by thin-layer chromatography have been developed; optimal conditions have been selected for chromatographic screening of amiodarone, allapinine, atenolol, propafenone and etacizine to determine them in biological fluids.

Ключевые слова: тонкослойная хроматография (ТСХ), амиодарон, аллапинин, атенолол, пропафенон, этацизин, кровь, моча.

Keywords: thin-layer chromatography (TLC), amiodarone, allapinine, atenolol, propafenone, etacizine, blood, urine.

Cердечно-сосудистые заболевания являются одной из основных причин смертности и инвалидизации населения большинства стран мира. Так, считается, что не менее 80 % смертности от инфаркта миокарда приходится на осложнение его течения сердечными аритмиями [17]. Среди антиаритмических лекарственных средств наиболее часто используют амиодарон, аллапинин, атенолол, этацизин, пропафенон и др.

Применяющиеся в клинике противоаритмические средства обладают многочисленными недостатками, имеют большое количество побочных реакций. Наиболее опасным среди них является возникновение аритмий (проаритмогенное действие) [7].

Необходимость в комбинировании препарата Алла­пинин с другими антиаритмическими препаратами возникает при резистентных формах нарушений ритма. Выбор доз при данной комбинации осуществляется индивидуально для конкретного больного и независимо для каждого препарата. Антиаритмические лекарственные средства неоднократно были причинами хронических и острых отравлений [13; 15]. В связи с этим химико-токсикологическое изучение и разработка экспресс анализа   антиаритмических препаратов является актуальной задачей.

Целью настоящего исследования является разработка методик определения антиаритмических ЛС  методами тонкослойной хроматографии, подобрать оптимальные условия хроматографического скрининга амиодарона, аллапинина, атенолола, пропафенона и этацизина для определения их в биологических жидкостях.

Методы. Изучение антиаритмических ЛС проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). Использовали пластинки “Merck”(Германия). Были приготовлены стандартные растворы лекарственных веществ в 96% этаноле, содержащие аллапинин (1мг/мл), амиодарон (8мг/мл), атенолол (4мг/мл), пропафенон (6мг/мл) и этацизин (2мг/мл). В качестве системы растворителей были использованы хлороформ-ацетон- 30 % уксусная кислота – этиловый спирт (16:4:1:9), хлороформ-ацетон-30 % уксусная кислота – этиловый спирт (18:2:1:7), хлороформ-ацетон-30 % уксусная кислота-этиловый спирт (18:2:1:9). В качестве реагентов для обнаружения зон локализации препарата на хроматографических пластинках применяли следующие проявители реагенты: реактив Драгендорфа, модифицированный по Мунье, спиртовой раствор бромтимолового синего,  УФ-облучение при 254 и 366 нм. [3; 4; 5; 14]. Результаты исследований приведены в таблице 1.

Таблица 1.

 Результаты хроматографирования (Значения Rf) антиаритмических ЛС методом  ТСХ

Наряду с этим, была изучена экстракция антиаритмических ЛС из водных растворов с целью определения исследуемых препаратов в биологических жидкостях [2; 6; 8; 12].  Для этого готовили смесь из стандартных рабочих растворов антиаритмических препаратов (раствор «А»). 1 мл раствора «А» содержал амиодарона 1 мг/мл, аллапинина 0,25 мг/мл, атенолола 1 мг/мл, пропафенона 0,75 мг/мл и этацизина 0,5 мг/мл. Для экстракции набирали 1 мл раствора А и помещали в коническую колбу объемом 50 мл, добавляли 9 мл ацетатного буферного раствора для создания рН 3,5-4,0 и  перемешивали. Экстракцию проводили с хлороформом  (10 мл), смесь центрифугировали (3000 об/мин) в течение 5 мин. Смесь переносили в делительную воронку и держали несколько минут для разделения слоев. Слой органического растворителя отделяли и  пропускали через фильтр, содержащий 3,0 г безводного сульфата натрия. Экстракцию хлороформом повторяли ещё два раза. Хлороформные извлечения объединяли, и органический растворитель упаривали на водяной бане при 40 ⁰С до сухого остатка. Сухой остаток растворяли в 3,0 мл этиловым спирте  (раствор «Б») и проводили анализ методом ТСХ. Для этого на стартовую линию хроматографической пластинки наносили  раствор «Б», а также рядом стандартные растворы исследуемых препаратов, затем пластинку помещали камеру, насыщенной системой растворителей. После проведения хроматографирования  зоны локализации веществ смотрели под УФ-лампой (254 нм) [10; 11; 16].

Для изолирования антиаритмических препаратов из биологических жидкостей поступали следующим образом: к 10 мл мочи (5 мл крови),  содержащий 1 мл раствора А, определенное количество антиаритмических препаратов, помещали в коническую колбу объемом 50 мл, добавляли 9 мл ацетатного буферного раствора для создания рН 3,5-4,0 и 1 мл 10 % раствора натрия хлорида и  перемешивали. Экстракцию проводили с хлороформом  (10 мл), смесь центрифугировали (3000 об/мин) в течение 5 мин. Смесь переносили в делительную воронку и держали несколько минут для разделения слоев. Слой органического растворителя отделяли и  пропускали через фильтр, содержащий 3,0 г безводного сульфата натрия. Экстракцию хлороформом повторяли ещё два раза. Хлороформные извлечения объединяли, и органический растворитель упаривали на водяной бане при 40 ⁰С до сухого остатка. Сухой остаток растворяли в 3,0 мл этиловым спирте  и проводили анализ методом ТСХ,  вышеуказанных условиях. Водную часть подщелачивают 10 % раствором аммония гидроксида до рН 9,0 и  экстрагируют хлороформом трижды (по 10 мл). Хлороформный слой после отделения от водной фазы  фильтруют через безводный натрия сульфат. Экстракцию хлороформом повторяли ещё два раза. Хлороформные извлечения объединяли, и органический растворитель упаривали на водяной бане при 40 ⁰С до сухого остатка. Сухой остаток растворяли в 3,0 мл этиловым спирте  и проводили анализ методом ТСХ,  вышеуказанных условиях [1].   

Результаты. Как видно из таблицы, при использовании в качестве системы растворителей смеси хлороформ-ацетон-уксусная кислота-этиловый спирт (16:4:1:9) происходит разделение компонентов смеси, но значения Rf пропафенона и амиодарона были очень близки друг к другу (0,73 и 0,75). При хроматографировании в системе растворителей хлороформ-ацетон-уксусная кислота-этанол (18: 2:1:7) были получены следующие результаты: аллапинин Rf=0,37, амиодарон Rf=0,64, пропафенон Rf=0,54, этазицин Rf=0,45 и атенолол Rf=0,12. Результаты анализа представлены на рис.1(а).

(а)                                                                              (б)

Рисунок 1. Хроматограммы  антиаритмических ЛС и экстракта, полученного из водного раствора (а),  а также экстракта, полученного из мочи (б)

Хроматографический анализ экстрактов, полученных из водных растворов показал, что при рН 4,0 хорошо экстрагируются амиодарон, аллапинин, пропафенон и этацизин, которые образуются в виде пятен на пластинке и имеют одинаковые значения  Rf со стандартными образцами. Отсутствие пятна атенолола показывает, что препарат плохо экстрагируется в кислой среде. В случае анализа экстрактов, полученных из щелочной среды, в системе растворителей хлороформ – ацетон – уксусная кислота – этиловый спирт (18:2:1:9), наряду с другими веществами: аллапинин Rf=0,28, амиодарон Rf=0,70, пропафенон Rf=0,53, этацизин Rf=0,41, обнаруживается также атенолол Rf=0,18, что доказывает его щелочного характера. Рис.1, (б).

Выводы. Разработаны методики анализа антиаритмических ЛС амиодарона, аллапинина, пропафенона, этацизина и атенолола методом ТСХ. Выбраны оптимальные условия хроматографического скрининга, для этого лучшей системой растворителей является хлороформ-ацетон- 30 % уксусная кислота- этиловый спирт (18:2:1:7), где наблюдается наилучщее разделение компонентов: аллапинин Rf=0,37, амиодарон Rf=0,64, пропафенон Rf=0,54, этазицин Rf=0,45 и атенолол Rf=0,12. Проведенные опыты изолирования антиаритмических ЛС из биологических жидкостей показали пригодность выбранных условий экстракции и анализа методом ТСХ. Разработанная методика изолирования и определения антиаритмических ЛС (таких как, амиодарон, аллапинин, пропафенон, этацизин, атенолол) из биологических жидкостей, рекомендуется для хроматографического скрининга при химико-токсикологических исследованиях.

Cписок литературы:

1. Алиходжаева М. И. Исследование некоторых синтетических диуретиков методом термодесорбционной поверхностно-ионизационной спектроскопии // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. – 2009. – №. 1. – С. 61–63.
2. Алиходжаева М.И. Контроль качества, стандартизация и химико-токсикологическое исследование фуросемида. – 1991.
3. Алиходжаева М.И. Фармакокинетические исследования амиодарона // Фармацияда таълим, фан ва ишлаб чиқаришнинг долзарб масалалари, илмий амалий анжуман материаллари. – Тошкент. – 2009. – Б. 207.
4. Алиходжаева М.И., Атаханов А.Ш., Сим С. Ориентировочное распределение амиодарона во внутренних органах отравленных животных // Фармацевтический журнал. – 2012. –  №1. – С.34–37.
5. Алиходжаева М.И., Попков В.А. Экспресс-анализ некоторых диуретиков в биологических жидкостях // Фармация Казахстана. – Алматы, 2009. –  №1. – С. 27–28.
6. Алиходжаева М.И., Симонов Е.А., Киричёк А.В., Попков В.А. Хромато-масс-спектрометрическое определение некоторых диуретиков в биологических жидкостях // Судебно-медицинская экспертиза. – 2009. – Т. 52. – №. 5. – С. 27-29.
7. Голицын С.П. Грани пользы и риска при лечении желудочковых нарушений ритма сердца // Международный журнал медицинской практики. – 2000. – Вып. 10. – С. 56–64.
8. Жалилов Ф.С. Флувоксаминни биологик суюқликлар таркибидан ажратиб олиш жараёнини ўрганиш //Farmatsevtika jurnali.–Тошкент. – 2020. – Т. 4. – С. 38– 43.
9. Жалилов Ф.С.,  Зокирова Г.Р., Мустафаев У.Г., Бекчанов Б.С. Определение cертралина из крови методом тонкослойной хроматографии // Вестник науки и образования. – 2019. – №. 23-1 (77). – С. 108–110.
10. Жалилов Ф.С., Султонова Г.М., Тожиев М.А. Депрес дори воситасини юпқа қатламли хроматография усулида таҳлилини ўрганиш // Ўзбекистон фармацевтик хабарномаси. – Тошкент. – 2009. – Т. 2. – С. 22–25.
11. Жалилов Ф.С., Таджиев М.А. Способы обнаружения флуоксетина из биологических жидкостей // Фармация.– Санк-Петербург. – 2016. – С. 587–590.
12. Искандаров А.И., Пулатова Л.Т. Cовременные возможности судебно-токсикологической экспертизы наркотических средств, прекурсоров и их структурных аналогов // Вопросы криминологии, криминалистики и судебной экспертизы. – 2020. – №. 1. – С. 129–135.
13. Юнусходжаева А.Н., Шоисломов Б.Ш., Алиходжаева М.И. Осложнения лекарственной терапии // Фармацевтический журнал. – 2014. – №. 3. – С. 365.
14. Alikhodjaeva M., Atahanov A., Xamdamov M. Development of Methodology for the Isolation and Determination of Propafenone in Blood Samples via HPLC //Journal of US-China Medical Science. – 2015. – Т. 12. – С. 163– 171.
15. Franck Clarot, Jean Pierre Goull, Marline Horst, Emmanuelle Vaz, Christian Lacroix, Bernard Proust. Fatal Propafenone Overdoses: Case Reports and A Review of the Literature //Journal of Analytical Toxicology. – 2003. – Vol. 27. P.595–599.
16. Tairhanovna P.L., Iskandarov A.I., Aripova T.U., Polyarush S.V., Sirov V.N. Development of improved methods of thin-layer chromatography and UV-spectrophotometry at expertise of paroxetin // European science review. – 2018. – № 7–8. – С. 303–309.
17. Zipes D.P., Camm A.J., Borggrefe M. ACC/AHA/ ESC 2006  guidelines for management of patients with ventricular arrhythmias and the prevention of sudden cardiac death: a report of the American College of Cardiology. American Heart Association Task Force and the European Society of Cardiology Committee for Practice Guidelines (Writing Committee to Develop Guidelines for Management of Patients With Ventricular Arrhythmias and the Prevention of Sudden Cardiac Death) // Circulation. – 2006. – Vol. 114. – Р. 385–484.