ВЛИЯНИЕ КОМПЛЕКСНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ МАСГК, КАРНИТИНА И МЕТИОНИНА НА БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ КРЫС С ПАРАЦЕТАМОЛОВЫМ ГЕПАТИТОМ

АННОТАЦИЯ

В данной статье представлены результаты исследования гепатопротекторных свойств растительных комплексных препаратов, созданных на основе моноаммониевой соли глицирризиновой кислоты (МАСГК), корнитина (препарат №2) и метионина (препарат №11) на крысах при экспериментальном гепатите, вызванном интоксикацией парацетамолом.

ABSTRACT

This article presents the results of a study of the hepatoprotective properties of herbal complex preparations based on the monoammonium salt of glycyrrhizic acid (MASGA), cornitine (preparation 2) and methionine (preparation 11) in rats with experimental hepatitis caused by intoxication with paracetamol.

Ключевые слова: парацетамоловый гепатит, гемическая гипоксия, биохимические показатели крови, моноаммониевая соль глицирризиновой кислоты(МАСГК), карнитин, метионин.

Keywords: paracetamol hepatitis, hemichypoxia, bloodbiochemical parameters, glycyrrhizin acid monoammonium(GAMAS) salt, carnitine, methionine.

Заболевания печени являются одним из ведущих видов патологии в мире. При этом разные категории больных имеют различную частоту и причины поражения печени. Распространенность лекарственных поражений печени неодинакова в разных странах. В Западной Европе на острый лекарственный гепатит приходится 15-20% молниеносных гепатитов, в Японии — 10%. В Англии первое место в этиологии фульминантной печеночной недостаточности занимает передозировка парацетамолом, оттесняя на второй план острые вирусные гепатиты. В США ежегодно регистрируются острые отравления парацетамолом, требующие госпитализации, с частотой примерно 29 на 100 000 населения, в Израиле — 57, в Великобритании — 200 [1, с.36].

Для лечения гепатитов используют гепатопротекторные средства, препятствующие развитию метаболических, функциональных и структурных нарушений в клетках печени. Гепатозащитные препараты оказывают положительное воздействие на основные синдромы гепатита, однако эффективность их наблюдается невысокой. В частности, отмечается их низкая терапевтическая активность при вирусных гепатитах. Кроме того, многие из них часто вызывают побочные эффекты в виде аллергии, гипертермии, усиления цитолитического и холестатического синдромов. Необходимо отметить и тот факт, что большинство применяемых в клинической практике гепатопротекторов являются дорогостоящими, так как выпускаются за рубежом, поэтому малодоступны для употребления населением [2, с.3].

В связи с этим существует необходимость внедрения новых эффективных отечественных средств гепатопротективного действия. Необходимо разрабатывать лекарственные средства из сырья растительного происхождения в силу их доступности и хорошей переносимости.

Продуцируемые растениями биоактивные метаболиты представляют интерес в качестве платформ для синтеза комбинаторных библиотек соединений и изучения зависимости структура - активность. Функциональный дизайн и оптимизация структуры природных соединений связанна с получением новых производных аналогов, представляющих интерес для доклинических исследований.

Глицирризиновая кислота - основной тритерпеновый гликозид корней голой солодки (Glycyrrhiza glabra) и относится к числу лидирующих природных соединений, перспективных для медицины в качестве основы для создания новых комплексирующих углеводсодержащих метаболитов, кислота также является действующим фармакологическим веществом с собственным высоким потенциалом [3, с. 5].

В последние годы в клинической практике применяются различные медицинские препараты, содержащие производные глицирризиновой кислоты, получаемые из корня солодки, и обладающие разнообразной биологической активностью, в частности антиоксидантной, в сочетании с низкой токсичностью [4, с. 16-22]. Они применяются в медицинской практике в качестве лекарственных препаратов широкого спектра действия. Используются комплексы и в качестве гепатопротекторов при лечении патологий печени различной этиологии [5, с.41].

Целью данного исследования являлось определение острой токсичности и выявление гепатотропной активности. на модели парацетамолового гепатита комплексных препаратов, созданных на основе моноаммониевой соли глицирризиновой кислоты (МАСГК), карнитина (препарат №2) и метионина (препарат №11).

Материалы и методы

Исследования проводили на модели острого поражения печени - парацетамолового гепатита. Опыты были выполнены на белых беспородных крысах обоего пола массой тела 180±20 г по 5 в группе. Все манипуляции с животными проводили в соответствии с Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в научных целях [6].

Лекарственное поражение печени воспроизводили введением парацетамола в желудок в дозе 500 мг/кг в течение 2 дней [7,с.305]. Исследуемые препараты: №2 (МАСГК+DL + карнитин HCl) и №11 (МАСГК+ метионин), вводили в течение 7 дней после воспроизведения гепатита в дозах 2,5 и 5 мг/кг внутрибрюшинно (в\б) в соответствии с указанными дозами для иммуномодулирующих препаратов. В качестве препарата сравнения использовали инъекционное лекарственное средство Стронгер Нео-Минофаген С (Япония), его крысам вводили в/б в дозе 6,5 мл/кг веса. Действующими веществами препарата являются: моноаммониум глицирризинат (в виде глицирризиновой кислоты), глицин, L-Цистеина Гидрохлорида гидрат (в виде L-цистеин гидрохлорида).

По окончании эксперимента животных усыпляли эфиром и проводили забор материала для регистрации биохимических показателей.

Уровень аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ) в сыворотке крови определяли кинетическим методом, содержание общего белка, глюкозы, мочевины общего и прямого билирубина в сыворотке крови определяли ферментативным методом на биохимическом автоматическом анализаторе «BS-380» фирмы MINDRAY (Китай) с помощью тест-систем фирмы Human (Германия). Концентрацию данных показателей регистрировали по калибровочной кривой при 6-точечной калибровке с использованием набора стабильных калибраторов различных концентраций. Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью статистических программ WindowsXP (Excel) [8,9].

Результаты и обсуждение

Парацетамол - гепатотоксин наиболее глубоко повреждает антитоксическую функцию печени с прооксидантными свойствами и приводит к развитию острого токсического гепатита (ОТГ). Согласно литературным данным введение парацетамола в организм приводит к гибели гепатоцитов путем апоптоза и некроза [10, с. 982;11, с. 4]. Механизм патогенного действия парацетамола связан с преобразованием зависимой от цитохрома Р-450 монооксигеназной системой в свободные радикалы и электрофильные интермедиаторы, ковалентно связывающие биомакромолекулы центролобулярных гепатоцитов.

Парацетамоловая модель имеет важную особенность - введение препарата сопровождается развитием у животных гемической гипоксии, которая связана с развитием анемии и снижением транспортной функции гемоглобина. Гепатотропность изучаемых препаратов связана с их метаболизмом в печени.

Анализ полученных результатов влияния комплексных препаратов на основе МАСГК, карнитина (препарат №2) и метионина (препарат №11) на парацетомоловый гепатит выявил разрозненность показателей, которые отличались от данных контрольной группы и группы сравнения.

Так как одной из основных причин повышения уровня активности трансаминазных ферментов (АЛТ и АСТ) является их выход из повреждённых органов и тканей в кровяное русло, можно предположить о наличии развивающихся деструктивных процессов в гепатоцитах, так как именно в печени локализуется наибольшее количество аланинаминотрансферазы.

Полученные результаты контрольных животных с токсическим гепатитом, указывают на то что, парацетамол и продукты его распада приводят к повреждению липидного бислоя мембран гепатоцитов, активацию синдромов цитолиза и холестаза, нарушению метаболизма белков, углеводов, биоэнергетики и угнетению ферментных систем детоксикацииксенобиотиков.

Так анализ полученных нами данных АЛТ и АСТ ,которые являются маркерными ферментами цитолиза гепатоцитов ,выявил разнонаправленные значения, показанные на рис. 1

Рисунок 1. Влияние комплексов №2 и №11 на показатели АЛТ и АСТ(U/L) в сыворотке крови крыс с парацетамоловом гепатитом в дозе 2,5мг/кг и 5 мг/кг.

Лечение отравленных парацетамолом животных комплексами№2 и №11в дозе 2,5 мг/кг и 5 мг/кг и препаратом сравнения в дозе 6,5 мл/кг снижало уровень трансаминаз соответственно: АЛТ – в 1,81; 2,14; 2,10;1,98 и 1,84 раза, АСТ в – в1,35;1,23;1,62;1,50 и 1,78 раза, по отношению к контрольной группе животных.

Таким образом, в условиях экспериментального гепатита отмечен ингибирующий эффект №2, №11 и Нео-Стронгера со стороны ферментных показателей, при этом нормализация активности трансаминаз свидетельствует о стабилизирующем влиянии на обменную активность печеночной клетки.

Причинами гипербилирубинемии могут быть увеличение образования билирубина, в результате превышающее способность печени экскретировать билирубин или повреждение печени, приводящие к нарушению секреции билирубина в желчь в нормальных количествах. Снижение количества билирубина может быть так же связано с нарушением били рубинвыделительной функцией печени.

На фоне ОТГ общий белок в сыворотке крови почти не отличался в группах №2 и №11по сравнению с показателями группы контроля (Рис2.)

Рисунок 2. Влияние комплексов №2 и №11 на биохимические показатели крови на модели парацетамолового гепатита у крыс в дозах 2,5мг/кг и 5,0 мг/кг.

У животных, леченных комплексами №2 и №11 в дозах 2,5 мг/кг ,5,0 мг/кг и препаратом сравнения в дозе 6,5 мл/кг средние уровни щелочной фосфатазы, которые являются маркерным ферментом холестаза соответственно были нижев,3,21;3,09;2,87;2,78 и 3,27раза, чем в контрольной группе животных.

Отмечено достоверное снижение уровня билирубина в сыворотке крови по отношению к контрольной группе животных, в особенности у крыс на фоне препаратов №2 в дозе 5,0 мг/кг(в 3,29раз),  №11 в дозе 2,5 мг/кг(в 2,125раз) и препарата сравнения. Необходимо отметить, что уровень билирубина у крыс этих групп восстанавливается до исходного уровня.

Растворимые формы карнитина и метионина в обоих дозах оказались сравнимы по эффективности с Нео-Стронгером. При этом, для этой формы характерно уменьшение/ увеличение эффекта при увеличении дозы с 2,5 до 5,0 мг/кг веса животного.

Таким образом, супермолекулярных комплексы МАСГК/карнитин и метионинапри токсическом гепатите, вызванном введением парацетамола снижают уровень маркеров цитолиза, холестаза и детоксикацирующую функцию печени и в конечном результате оказывают гепатопротекторное действие, по эффекту, не уступающему действию препарата Нео-Стронгер.

Ранжирование супермолекулярных комплексов по общему влиянию на биохимические показатели крови определило перспективный препарат №2 комплекс МАСГК/карнитин в дозах 2,5 и 5,0 мг/кг.

Полученные результаты обнадеживают и создают предпосылку для дальнейшего изучения и использования комплексов МАСГК/карнитин и МАСГК/метионин для лечения заболеваний, вызванными различными токсическими поражениями печени.

Список литературы:

1. Королева М. В. Гепатопротекторные свойства и фармакодинамика лекарственных средств, влияющих на метаболические процессы, у больных с экзогенно- токсическими поражениями печени: Дис. … докт. мед. наук. – Волгоград, 2015. - С. 353.
2. Гайсаев Р.О. Влияние гепатопротектора маскара на морфофункциональное состояние печени у больных хроническим гепатитом: Автореф. дис….канд. мед. наук. – Томск, 2000. – 31 с.
3. MaioneF., MinosiP., GiannuarioA. Di, etal., Long-lasting anti-inflammatory and antinociceptive effects of acute ammonium glycyrrhizinate administration: pharmacological, biochemical, and docking studies // Molecules. - 2019. - Vol. 24. - №13. -Р. 2453.
4. Исследования антиоксидантных свойств некоторых растворимых форм супрамолекулярных комплексов на основе моноаммониевой соли глицирризиновой кислоты // Universum: химия и биология: электрон. научн. журн. Далимова С.Н. [и др.]. 2021. 1(79), с.16-22.
5. Доркина Е.К. Изучение гепатозащитного действия природных флавоноидных соединений // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2004. - Т 67. -№ 6. -С. 41-46.
6. Directive 2010/63/ EU of the European parliament and of the council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes / [Электронныйресурс]. –Режимдоступа: https://eur-lex.europa.eu/legal-content/EN/TXT/?uri=uriserv%3AOJ.L_.2010.276.01.0033.01.ENG&toc=OJ%3AL%3A2010%3A276%3ATOC
7. Толстиков Г.А., Болтина Л.А., Кондратенко P.M.Солодка: биоразнообразие, химия и применение в медицине. - Новосибирск: НП Академическое изд-во "Гео", 2007. - 305 с.
8. Майборода А.А., Калягин А.Н., Зобнин Ю.В., Щербатых А.В. Современные подходы к подготовке оригинальной статьи в журнал медико-биологической направленности в свете концепции «доказательной медицины» //Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2008. -Т.76. - №1.-С.5-8
9. Стрелков Р.Б.Статистические таблицы для ускоренной количественной оценки фармакологического эффекта // Фармакология и токсикология. - 1986.-№4.-С.100-104.
10. HendersonN., PollockK., FrewetJ.,MackinnonA., FlavellR., DavisR., SethiT., SimpsonK.Criticalroleofc-jun (NH2) terminal kinase in paracetamol- inducedacute liver failure// Gut. - 2007. - Vol.56. - №7. - P. 982-990.
11. Буеверов А.О., Грязин А.Е. Клинические аспекты изучения апоптоза при хронических вирусных гепатитах // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, калопроктологии. - 2006. - № 2. - С. 4-10.