ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ ИЗ ЛИСТЬЕВ ПЕРСИКА ОБЫКНОВЕННОГО (Persica vulgaris Mill.), ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО В КАРАКАЛПАКСТАНЕ

АННОТАЦИЯ

В данной работе  приведены результаты анализа по изучению острой токсичности биологически активной добавки «СЭЛПЕРС-КР» На основании результатов токсикологических исследований установлено, что  БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» (ООО «HALSICA», Узбекистан) по параметрам острой токсичности относится к 4 классу опасности (малотоксичные вещества), не обладает кумулятивным действием, не оказывает раздражающего действия на слизистые и не обладает сенсибилизирующим эффектом, а также не вызывает дистрофических, некротических и воспалительных изменений в структуре внутренних органов опытных животных.

ABSTRACT

This paper presents the results of an analysis of the acute toxicity of the biologically active additive «СЭЛПЕРС-КР». Based on the results of toxicological studies, it was established that the food supplement «СЭЛПЕРС-КР» (ООО «HALSICA», Uzbekistan) according to the parameters of acute toxicity belongs to class 4 dangers (low toxic substances), does not have a cumulative effect, does not irritate the mucous membranes and does not have a sensitizing effect, and also does not cause dystrophic, necrotic and inflammatory changes in the structure of the internal organs of experimental animals.

Ключевые слова: «СЭЛПЕРС-КР», капсула, острая токсичность, летальная доза, белые крысы, мыши, морские свинки, сенсибилизирующий эффект.

Keywords: «СЭЛПЕРС-КР», capsule, acute toxicity, lethal dose, white rats, mice, guinea pigs, sensitizing effect.

Введение. Необходимость расширения ассортимента лекарственного растительного сырья на фармацевтическом рынке, привлекает внимание ученых к исследованию новых видов лекарственных растений, в том числе среди культур, традиционно считающихся пищевыми. К таким пищевым видам, обладающим широким спектром фармакологического действия относится персик обыкновенный (Persica vulgaris Mill.).  Особенный интерес вызывают листья персика обыкновенного – Persicaе vulgaris folia, как перспективный вид лекарственного растительного сырья.

Цель. Оценка токсикологических показателей БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» (ООО «HALSICA», Узбекистан).

Материалы и методы. Объектом исследования явилось биологически активная добавка к пище «СЭЛПЕРС-КР» - капсулы (ООО «HALSICA», Узбекистан). Экспериментальные исследования проводили на мелких лабораторных животных (белый крысах и мышах, морских свинках) в соответствии с действующей нормативно-методической базой. В условиях эксперимента установление острой токсичноси исследуемой БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» - проведено на мелких лабораторных животных при однократном внутрижелудочным поступлении препарата в дозе 5000 мг/ кг веса животных[4]. Кумулятивная способность исследуемой БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» оценивалась в подостром эксперименте методом Lim et an. на белых крысах массой 110-120 г. Исследуемую добавку экспериментальные животные получали с пищей в течение 28 дней в нативном виде. Исходная доза составляла максимально 1/10 от максимально переносимой в остром опыте в пересчете на вес животного с последующим увеличением каждые 4 дня в 1,5 раза. Контрольные животные получали в эквивалентном объеме очищенную воду. Доза вводилась в виде водного раствора содержимого капсул.  Сенсибилизирующий эффект исследуемых БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» оценивался в опытах на морских свинках после внутрикожной инъекции 50% раствора изучаемой добавки с постановкой провокационной накожной пробы. Критерием сенсибилизации служили кожные проявления на месте аппликации по Магнуссона- Клигмана через 24 часа в баллах по соответствующей шкале.

Наблюдения проводились следующим образом:  ежедневно в течение акклиматизации и с первого по последний день эксперимента, вес тела до приема препарата, через каждые 7 дней до конца эксперимента (смертность/паралич); ежедневно в течение акклиматизации и  4 раза (через 1,2,3 и 4 часа) после приема дозы в первый день, далее в зависимости от проявления клинических признаков токсичности, 1 раз ежедневно в течение всего периода наблюдения (клинические признаки). Все отклонения фиксировались. При экстраполяции полученных токсикологических данных с животных на человека учитывали межвидовые различия токсического эффекта у подопытных животных, степень токсичности и опасности добавки, особенности проведения конкретного эксперимента (способы и методы введения вещества в организм, сезонные и циркадные ритмы и т.п), факторы неопределенности. При оценке раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки глаз, сенсибилизирующее действие использовали прямой перенос на человека результатов экспериментов. Экспериментальные испытания проведены с соблюдением правил, приниятыми Европейской конвекцией по защите позвоночных животных для экспериментов или иных научных целей (ЕТС № 123. Стразбург, 18.03.1986 г.).

Биохимические анализы крови проводили на анализаторе полуавтоматическом биохимическом «CYANSmart» c программным обеспечением (Cypress Diagnostics, Бельгия),  по стандарным методикам (АСТ, АЛТ, ЩФ, общий белок наборы реактивов Cypress Diagnostics, Бельгия), гематокрит определяли на гематокритной центифуге (Cypress Diagnostics, Бельгия), развернутый анализ периферической крови определяли в камере Горяева.

Полученные результаты подвергались статистической обработке с использованием стандартных программ с оценкой значимости показателей (Mm) на базе Word 2019 и pазличий по t-критерию Стьюдента. Различия в сравниваемых группах считались достоверными при уровне значимости 95% (р0,05).

В течение испытаний масса тела животных, клинические признаки интоксикации, гематологические и биохимические показатели, смертность/паралич вводились в компьютерную систему Профилактическая токсико-гигиеническая лаборатория, Управления санитарно-эпидемиологического надзора, Главного медицинского управления при администрации Президента Республики Узбекистан.

Результаты и обсуждение

Оценки острой токсичности. За период проведения эксперимента смерти подопытных животных не наблюдалось. В последующие сутки наблюдения животные сохраняли нормальную реакцию на внешние раздражители, общее состояние и поведение животных в опытной группе было удовлетворительно. Все животные были активны и охотно поедали корм, шерстяные покровы и видимые слизистые не изменялись. Гибели животных в течение всего периода наблюдения не отмечали. Средняя летальная доза исследуемой БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» для животных, взятых в эксперимент, не достигнута. Не установлено различий в чувствительности мышей и крыс к препарату в зависимости от вида и пола.

Таким образом, результаты токсикометрии и данные наблюдений за экспериментальными животными в периоде после острого отравления позволяют позиционировать БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» как практически нетоксичное и малоопасное (IV класс опасности по ГОСТ 12.1.007) вещество.

Оценка кумулятивного действия.  У животных, взятых в эксперимент, в течение всего время наблюдения не отмечено каких-либо отклонений в поведении. Аналогично контрольным животным, они были активны, опрятны, хорошо поедали корм и адекватно реагировали на внешние раздражители. Признаков интоксикации и летальных исходов не отмечено. Через каждые 7 суток определяли массу тела животных. При этом достоверных различий между контрольной и опытной группами не отмечено [5].

При исследовании гематологических показателей периферической крови подопытных животных, получавших исследуемую БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» не выявлено достоверных изменений ни по одному из исследованных параметров (количество эритроцитов, -10; гемоглобин, г/л; лейкоциты,-10).

Таблица 1.

Усредненные показатели морфологического состава крови крыс при субхроническом воздействии изучаемой БАД к пище

Общее количество эритроцитов, лейкоцитов и содержания гемоглобина у всех подопытных животных статистически значимо не отличались от контроля (табл.1) [6].

Как показали результаты изучения от значений таковых у контрольной группы. Показатели содержания общего бе, биохимических показателей сыворотки крови опытных и контрольных животных активность трансаминазных ферментов (АсТ, АлТ) и щелочной фосфатазы (ALP) экспериментальных животных достоверно не отличались лка (ТР) контрольной и опытных групп были также достоверно одинаковы (табл.2)

Таблица 2.

Биохимические показатели крови белых крыс при 28 дневном воздействия БАД к пище

Патоморфологические исследования проводились на следующий день, т.е. после последнего введения в опытных и контрольной группах. По результатом макроскопического исследования изучаемых органов различий между опытным и контрольной группами не установлено. В каждой группе:

- грудная и брюшная полости выпота не содержали. Положение внутренних органов грудной и брюшной полостей нарушений не представляло. Париетальный и висцеральный листки плевры и брюшины тонкие, блестящие, гладкие;

- щитовидная железа красноватого цвета, обычной величины и формы, умеренно плотной консистенции. Тимус треугольной формы, беловатого цвета, умеренно плотной консистенции, обычных размеров;

- интима аорты гладкая, блестящая, беловатого цвета. Диаметр аорты не изменен. Листки перикарда тонкие, прозрачные, гладкие, величина и форма сердца изменений не имеют, левый желудочек сокращен, в правом содержится незначительное количество темной жидкой крови, клапаны сердца тонкие, блестящие, гладкая мышца сердца на разрезе однородной коричневатой окраски, умеренно плотная;

- просвет трахеи и крупных бронхов у животных опытных и контрольной группы не изменен, слизистая оболочка блестящая, гладкая, бледного цвета, легкие воздушные, без уплотнений на ощупь, бледно-розовой окраски;

- слизистая пищевода блестящая, гладкая, бледного цвета, желудок обычной величины и формы, заполнен пищевым содержимым, слизистая оболочка без железистой части желудка складчатая, розоватая, блестящая, гладкая, поджелудочная железа плоской формы, бледно-розового цвета, дольчатая, умеренно плотной консистенции;

- форма и величина печени изменений не представляли: поверхность печени гладкая, однородной темно-красной окраски, капсула тонкая, прозрачная, ткань печени на разрезе полнокровная, умеренно плотная; 

- селезенка обычной формы, темно-вишнего цвета, умеренно плотной консистенции, поверхность органа гладкая, капсула тонкая на разрезе, на темно-красном фоне селезенки видны мелкие сероватого цвета фолликулы;

- величина и форма почек не изменены: поверхность почек коричневатого цвета, гладкая, капсула тонкая, прозрачная, легко снимаемая, на разрезе хорошо различими корковое и мозговое вещество, надпочечники округлой формы, бледно-желтого цвета, с гладкой поверхностью, умеренно плотные, на разрезе четко видно темноокрашенное мозговое вещество;

- мочевой пузырь заполнен прозрачной мочой, слизистая оболочка пузыря гладкая, блестящая, окраска бледная;

- оболочки головного мозга у животных всех опытных групп тонкие, прозрачные, вещество мозга обычной плотности, на фронтальных разрезах мозга отчетливо выделяются серое и белое вещество, желудочки мозга обычной величины, расширения нет. При гистологическом исследовании препаратов легких, миокарда, печени почек и слизистой желудка подопытных животных всех групп дистрофических, воспалительных или некробиотических изменений указанных выше органов не наблюдалось.

Проведенные исследования показали, что ежедневное в течение 28 дней внутрижелудочное введение крысам в возрастающей дозе БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» не вызывает летальных эффектов, не приводит к изменениям физиологических показателей, не вызывает дистрофических или деструктивных изменений паренхиматозных органов и не сопровождается раздражением слизистых оболочек.

Таким образом, проведенный 28 дневный эксперимент показал, что исследуемая БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» не обладает кумулятивными свойствами.

Сенсибилизирующее действие. Тестирование по оценке сенсибилизирующего эффекта, проведенное после внутрикожной инъекции и провокационной накожной пробы с повторным нанесением испытуемого образца БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР», показало следующее: у животных на месте аппликации после проведения накожной провокационной пробы реакция была четко отрицательной (по оценочной шкале: «-/0»). Средне групповой индекс сенсибилизации (IS)=0 баллов.

Таблица 3.

Результаты оценки сенсибилизирующего действия изучаемой БАД к пище

Таким образом, по показателям острого, подострого воздействия, сенсибилизирующего действия, влияния на слизистые оболочки глаз и данным морфологических состава крови исследуемую БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР», можно отнести к малотоксичным и практически нетоксичным препаратам (IV класс опасности по ГОСТ 12.1.007 и V класс опасности по гигиенической классификации) [4; 6; 7; 8; 9; 10].

Выводы

На основании результатов токсикологических исследований установлено, что БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР» (ООО «HALSICA», Узбекистан) по параметрам острой токсичности относится к 4 классу опасности (малотоксичные вещества), не обладает кумулятивным действием, не оказывает раздражающего действия на слизистые и не обладает сенсибилизирующим эффектом, а также не вызывает  дистрофических, некротических и воспалительных изменений в структуре внутренних органов опытных животных.

Следовательно, полученные результаты позволяют сделать заключение о том, что при повторном многократном пероральном поступлении в организм БАД к пище «СЭЛПЕРС-КР», производства ООО «HALSICA», Узбекистан не оказывает системного и общего токсикологического действия и по токсикологическим показателям соответствует требованиям безопасности.

Список литературы:

1. ГОСТ 32644 «Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Острая пероральная токсичность – метод определения класса острой токсичности».
2. ГОСТ 32641 «Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Определение токсичности при повторном/многократном пероральном поступлении вещества на грызунах. 28-девный тест».
3. ГОСТ 32375 «Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Испытания по оценке кожной сенсибилизации».
4. Методические указания "Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнений кожи" (утв. заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 1 ноября 1979 г. № 2102-79). –С. 2-3.
5. Миронова.А.Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Ч.1 /Под ред.  Москва, 2012.-С.14-18.
6. Джахангирова Г.З. Использование растительных добавок с целью повышения пищевой ценности и физиологической значимости хлебобулочных изделий // Универсум. Ташкент, 2017. -С.5.
7. Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармакологических средств. Россия, 1997.
8. Межгосударственный стандарт ГОСТ 31674-2012 «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичности». Стандартинформ, Москва, 2014. –С 9
9. Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнений кожи // Методические указания. Утв. заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 1 ноября 1979 г. № 2102-79
10. Upadhyay P., Shukla.R., Tiwari K.N., Dubey G.P., Mishra S.K., Toxicity assessment of the alcoholic leaves extract of Reinwardtia indica // Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences. India, 2019 -P. 4-7.