Микроскопическое изучение небной миндалины при чуме собак

АННОТАЦИЯ

Небная миндалина собак при алиментарном заражении вирусом чумы плотоядных подвергается глубоким деструктивным изменениям лимфоидной ткани и покровного эпителия. Зоны Т- и В-лимфоцитов не различимы и они в количественном отношении сильно атрофированы. Соответствующие эозинофильные вирусные тельца включения обнаруживаются внутри эпителиоцитов, лимфоцитов, макрофагов и ретикулярных клеток. Отмечаютсяотдельныегигантскиеклетки.

ABSTRACT

Dogs by alimentary infection with canine distemper virus the lymphoid tissue and surface epithelium of palatine tonsil undergoes deep destructive alterations. T- and B-lymphocyte zones are indistinguishable and are quantitatively highly atrophied. Appropriate eosinophilic viral inclusion bodies found in epithelial cells, lymphocytes, macrophages and reticular cells. There have been some giant cells.

Введение. Вирус чумы собак, относящиеся к роду морбилливирусов и семейству пармиксовирусов, выявляется в разных клетках, тканях и органах инфицированных животных [4]. Как известно, данный вирус обладает иммуносупрессорным свойством [8; 9], который приводит к макро- и микроскопическим изменениям лимфоидной ткани, включая атрофию тимуса, истощению Т- и В-зон лимфоцитов с исчезновением вторичных лимфоидных фолликулов, гиперплазию ретикулярных клеток, формированию гигантских клеток, внутриклеточных вирусных телец включений в ретикулярных и лимфоидных клетках [1, c. 84; 2, c. 89; 6; 7; 9].  

Глубокие исследования в области иммуноморфологии и изучение патологий различного генеза с точки зрения иммунных реакций являются актуальными в биологии, медицине и ветеринарии.

Небная миндалина располагается в начале желудочно-кишечного тракта и является передовой линией иммунного надзора против алиментарных антигенов, играет ключевую роль в инициации иммунного ответа против них [3, c. 277; 5]. Wunschmann A., Kremmer E., Baumgartner W. с помощью маркеров иммуногистохимии CD3, CD4, CD5, CD8 и IgG экспрессирующие В-лимфоциты изучали клеточный состав небной миндалины в норме при чуме плотоядных [9].

Чума плотоядных, несмотря на широкую известность и изученность, в настоящее время не теряет свою актуальность среди патологов, так и вирусологов. Особый интерес вызывает уникальная способность этого вируса проникать в клетки разных тканей и органов, и за счет этих клеток размножаться, распространяясь по всему организму. Мультисистемность и иммуносупрессорное свойство ВЧП, может быть использоватся в качестве модели для изучения иммунодефицитных вирусных болезней человека, придавая этой болезни биомедицинское значение.

Целью данного исследования является изучение морфофункционального состояния небной миндалины при чуме собак и сравнивание их с результатами других исследователей.

Объекты и методы исследования. Данная работа выполнялась в Кыргызском национальном аграрном университете им. К.И. Скрябина (Кыргызстан) и Институте ветеринарной патологии Цюрихского университета (Швейцария, 2007-08). Тканевые пробы от небной миндалины были получены от 8 собак инфицированной вирусом чумы плотоядных и зафиксированы в 10%-ном водном растворе нейтрального формалина. Обработка тканевых проб проведена согласно общепринятой процедуре гистологической техники. Серийные срезы готовились на полуавтоматическом микротоме новой модификаций толщиной 2-4 мкм.

Для общего обзора гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Восстановление антигена для иммуногистохимии (ИГХ) производили с помощью автоклава Паскаль (20 минут, +98⁰ С) при использовании антиген восстанавливающего буферного раствора рH 6.0 (цитратный буфер) в соответствии с инструкцией производителя. Был использован SABC (Streptavidin and Biotinylated horseradish peroxidase macro-molecular Complex) метод ИГХ. Для выявления вируса чумы плотоядных использовали  антитело mono AK 10H3. Окрашивание производили вручную в специальной влажной камере. Срезы дополнительно окрашены гематоксилином Майера.

Результаты исследования. В норме у собак небная миндалина содержит компактное скопление лимфоидной ткани в виде лимфоидных фолликулов разного размера и формы (В-зону), диффузно-локализованную группу клеток (Т-зону) и покрыть многослойным плоским эпителием  (Рис. 1 А⁰). Кроме Т- и В-лимфоцитов, лимфоидную ткань миндалины образуют макрофаги, заселяясь в определенных местах диффузно и мелкими группами. Пролиферативная активность лимфоидной ткани отмечается во вторичных лимфоидных фолликулах и среди клеток Т-зоны органа (Рис. 1 А⁰).  

При чуме собак, орган в структурном и функциональном отношении подвергается глубоким деструктивным изменениям. Покровный эпителий органа истончен, в отдельных местах он полностью разрушен. В поверхностных слоях эпителиальные клетки, потеряв межклеточные связи, разрыхлены. Покровный эпителий диффузно-инфильтрировано иммунокомпетентными клетками. Соскообразная структура между базальным слоем покровного эпителия и рыхлой соединительной тканью собственного слоя слизистой оболочки не наблюдается. Отмечается прямолинейная структура базального слоя и в нем видны лишь единичные фигуры митоза (Рис. 1 А). Эпителиоциты всех слоев, особенно клетки базального слоя, содержат одиночные или множественные внутрицитоплазматические (внутриядерные) эозинофильные вирусные тельца включения разного размера и формы (Рис. 1 Б). Собственно-соединительнотканый слой и подслизистая основа слизистой оболочки не различимы. Сразу же после базальной мембраны начинается рыхлое расположение, в петлях ретикулярной сети, лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов, гигантских и других клеток (Рис. 1 Б). Большинство клеток в этой зоне содержат эозинофильные вирусные тельца включения. Отмечаются двуядерные клетки и значительное количество фигур апоптоза и мелкие апоптосомы. Т- и В-зоны лимфоидной ткани не различимы. По сравнению с нормой лимфоидная ткань небной миндалины при данной патологии сильно атрофировано. Пролиферативная активность клеток лимфоидной ткани встречаются в единичных случаях на разных участках миндалины. Вирусосодержащие клетки дали интенсивную реакцию на маркер ИГХ AK 10H3, что наиболее ярко выделяется в эпителиальном покрове и в местах локализации лимфоидных фолликулов (Рис. 1 В). AK 10H3 положительные клетки рассеяны повсеместно в небной миндалине одиночно и небольшими группами.  

Рисунок 1. Парафиновый срез небной миндалины клинически здоровой и инфициированной вирусом чумы собак. А⁰ – нормальная гистоструктура небной миндалины. Пролиферативно-активные клетки окрашены на красно-коричневый цвет. Monoclonal Mouse Anti-Proliferating Cell Nuclear Antigen. Clone PC10. SaBC метод ИГХ. х25; А – глубокие деструктивные изменения  органа при чуме. Окраска гематоксилином и эозином. х25; Б – эпителиальные и лимфоидные клетки с эозинофильными вирусными тельцами включениями (указаны стрелкой). Окраска гематоксилином и эозином. х250; В – вирусосодержащие клетки дали положительную реакцию на антитело AK 10H3.CDV mono AK 10H3. SaBC метод ИГХ. х62,5.

Анализируя результаты собственных исследований и данные научной литературы, мы полагаем, что вирус чумы плотоядных обладая уникальным лимфотропным свойством, разрушает небную миндалину в структурном и функциональном отношениях, и приводит организм собак к иммунодефицитному состоянию.