ВЛИЯНИЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ АЦЕТИЛЕН СОДЕРЖАЩИХ ПРОИЗВОДНЫХ КАРБОМАТОВ НА ТЕЧЕНИЕ АДЬЮВАНТНОГО АРТРИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

АННОТАЦИЯ

В статье проводится исследование противовоспалительной активности производных 1,2,3-триазолов. Работа посвящена оценке влияния соединения MP-7 — триазольного производного на воспалительный процесс при экспериментальной модели ревматоидного артрита. В качестве контрольных препаратов использованы традиционные нестероидные противовоспалительные средства (НПВП), такие как натрий диклофенак, бутадион и индометацин.

ABSTRACT

This article presents a study of the anti-inflammatory activity of 1,2,3-triazole derivatives. The work is focused on evaluating the effect of compound MP-7 — a triazole derivative — on the inflammatory process in an experimental model of rheumatoid arthritis. Traditional non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) such as sodium diclofenac, butadione, and indomethacin were used as reference medications.

Ключевые слова: карбаматы, пропаргиловые эфиры, диклофенак натрия, формалин, противовоспалительная активность, токсичность.

Keywords: carbamates, propargyl esters, sodium diclofenac, formalin, anti-inflammatory activity, toxicity.

Введение. Воспалительные заболевания опорно-двигательного аппарата, в частности ревматоидный артрит, представляют собой актуальную медико-биологическую проблему, обусловленную хроническим рецидивирующим течением, высоким уровнем инвалидизации и снижением качества жизни пациентов [3,5,8]. Современные стратегии фармакотерапии включают применение нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП), обладающих выраженным анальгезирующим и противовоспалительным действием [3,4,9]. Однако длительное использование НПВП ограничено их гастроинтестинальной и кардиоваскулярной токсичностью [4,7].

В связи с этим особую значимость приобретает поиск и разработка новых соединений с выраженным противовоспалительным эффектом и благоприятным профилем безопасности [2,6]. Ацетиленсодержащие карбаматы в последние годы рассматриваются как перспективный класс гетероорганических соединений, способных модулировать воспалительный каскад за счёт влияния на продукцию цитокинов, простагландинов и других медиаторов воспаления [1,10].

Целью настоящего исследования является экспериментальная оценка противовоспалительной активности ацетиленкарбамата MP-7 и его сравнение с традиционными НПВП на модели адъювантного артрита у крыс.

Материал и методы. С целью моделирования воспалительного процесса, крысам под наркозом на основе эфира интрадермально вводили по 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда (ПАФ) в область у основания хвоста. День введения препарата обозначали как нулевой, а последующие дни отсчитывались в хронологическом порядке (1-й, 2-й и т.д.). Начиная с момента индукции воспаления, в течение следующих 30 суток ежедневно проводили клиническое наблюдение за состоянием животных. Измерения объёма задних конечностей выполнялись с использованием водного плетизмометра: первое измерение проводилось до введения ПАФ, а далее — каждые четыре дня, начиная со 2-го дня опыта. Помимо этого, фиксировали число поражённых лап и наличие симптомов воспаления в межпозвоночных суставах.Оценка степени развития хронического воспалительного процесса проводилась на 10-е, 15-е и 25-е сутки. Терапия начиналась с 10-го дня после индукции воспаления. Животные были разделены на следующие экспериментальные группы:контрольная (n=**), не получавшая лечения;

группа 1 — диклофенак натрия, 5 мг/кг внутрь (p.o.),группа 2 — бутадион, 5 мг/кг (p.o.),группа 3 — индометацин, 5 мг/кг (p.o.),группа 4 — MP-7 в дозах 50, 75 и 100 мг/кг (p.o.) (n=**).

Для оценки степени артритических изменений у животных проводили измерение толщины задних лап, на основании чего рассчитывался индекс артрита. Уровень иммуновоспалительной активности определяли посредством количественного анализа содержания цитокинов в сыворотке крови, включая ключевые провоспалительные маркеры — интерлейкин-1β (ИЛ-1β), интерлейкин-6 (ИЛ-6), фактор некроза опухоли-α (ФНО-α), интерлейкин-8 (ИЛ-8), а также противовоспалительный интерлейкин-10 (ИЛ-10).

Забор крови осуществлялся в объёме 3–5 мл в асептических условиях на этапе эвтаназии животных. Далее образцы подвергались центрифугированию при 3500–4000 об/мин в течение 10 минут. Полученную сыворотку делили на порции и замораживали при –20 °C, обеспечивая стабильность хранения в течение 1–4 месяцев и избегая повторных циклов размораживания.

Перед началом анализа все реагенты и пробы выдерживались при комнатной температуре. Определение концентраций цитокинов проводили методом ИФА с использованием готовых наборов от компании «Цитокин» (Санкт-Петербург), в полном соответствии с регламентом производителя. Наборы включали 96-луночные планшеты с иммобилизованными моноклональными антителами, стандартные растворы и соответствующие конъюгаты.

Статистическая обработка данных осуществлялась с использованием программного обеспечения Statistica 6.0 для ОС Windows. Расчёты включали средние значения, стандартную ошибку средней и проверку статистической значимости различий методом t-критерия Стьюдента.

Полученные результаты и их обсуждение.

Через 25 суток терапии диклофенак, индометацин и бутадион снижали индекс артрита у подопытных животных в среднем на 30–35%. В то же время введение производного триазола MP-7 в дозе 100 мг/кг приводило к более выраженному эффекту — снижению показателя на 50–55%.Анализ цитокинового профиля показал, что MP-7 (100 мг/кг) вызывал достоверное снижение концентраций ключевых провоспалительных медиаторов IL-1β, IL-6 и TNF-α на 55–65%. В то время как диклофенак и индометацин обеспечивали уменьшение их уровней в пределах 50–55%.

Кроме того, терапия MP-7 сопровождалась умеренным, но стабильным повышением уровня IL-10 (на 10–14%), что может свидетельствовать о более мягком и регулируемом противовоспалительном действии препарата по сравнению с классическими НПВП. Подобный эффект может быть обусловлен влиянием MP-7 на активацию противовоспалительных путей, включая индукцию синтеза IL-10, обладающего иммуносупрессивной активностью. Для изучения особенностей действия MP-7 были проведены две серии экспериментов, профилактическая схема введения — введение MP-7 с 1 по 14 сутки после индукции адъювантного артрита (ПАФ), лечебная схема — введение MP-7 с 10 по 22 сутки.

Оценка эффективности препаратов в обеих схемах проводилась по степени выраженности суставного синдрома на 14-й и 22-й день эксперимента. Полученные результаты сравнительного анализа представлены в таблице-1.

Таблица 1.

Сравнение эффективности MP-7 и НПВП

У лабораторных животных контрольной группы первые объективные признаки формирования экспериментального адъювантного артрита регистрировались на 7–10 сутки после интрадермального введения полного адъюванта Фрейнда (ПАФ). Начальная стадия патологического процесса характеризовалась развитием локального воспалительного ответа — возникновением выраженного отёка, гиперемии одной (иногда двух) задних конечностей, а также местной реакции в зоне инъекции.

Наиболее интенсивное проявление клинической симптоматики наблюдалось в период между 18 и 22 сутками с момента индукции. В это время развивался генерализованный полиартрит, сопровождавшийся значительным ограничением двигательной активности, диффузным выпадением шерстного покрова, появлением ринореи и признаков кишечной дисфункции (включая диарею). У значительной части животных отмечались морфологические изменения хвоста, придававшие ему характерную «четкообразную» форму. Прослеживалась устойчивая корреляция между сроками появления первых симптомов и тяжестью клинической картины: чем раньше развивался артрит, тем более выраженными были воспалительные изменения в суставах. К 25 дню у большинства животных, несмотря на частичное ослабление симптомов, сохранялись стойкие деформации суставов, указывающие на хроническое течение процесса.

При профилактическом введении исследуемого соединения МР-7 в период с 1 по 14 сутки после индукции ПАФ отмечалось заметное терапевтическое влияние. Применение препарата в дозировке 100 мг/кг обеспечивало отсрочку клинической манифестации артрита в среднем на 3,8 суток (что соответствует снижению на 38,8% по сравнению с контролем), а в дозе 200 мг/кг — на 5,8 суток (59,2%). В сравнении с этим, соединение МР-10 в дозах 50 и 100 мг/кг замедляло дебют заболевания на 2,3 суток (23,5%) и 6,5 суток (66,3%) соответственно.

 Снижение интенсивности суставного воспаления в балльной системе оценки под влиянием МР-7 составило 57,4% при дозе 100 мг/кг и 66,5% при 200 мг/кг. В то время как диклофенак натрия демонстрировал меньшую эффективность — 52,2% и 61,5% при дозировках 50 и 100 мг/кг соответственно. Частота развития артрита в группе, получавшей МР-7 (200 мг/кг), составила 33,5%, в то время как при применении диклофенака в дозе 100 мг/кг она достигала 38,5%. В контрольной группе заболеваемость составила 100%.

Препарат бутадион продемонстрировал лишь незначительную задержку развития симптоматики — на 18,4%, при этом данный показатель не достиг уровня статистической значимости.При переходе к терапевтическому режиму применения (с 10 по 22 сутки после индукции), МР-7 также показал высокую эффективность. Уже начиная с 12 суток наблюдалась прогрессирующая динамика снижения выраженности воспалительных изменений. К 22 дню у животных, получавших МР-7 в дозах 30 и 100 мг/кг, достоверно регистрировалась меньшая тяжесть суставного синдрома по сравнению с группами, где применялись такие традиционные НПВП, диклофенак натрия. Полученные результаты сравнительного анализа представлены в таблице -2.

Таблица 2.

Показатели уровни про- и противовоспалительных цитокинов у экспериментальных животных на фоне введения исследуемых препаратов

Далее наблюдались значимые изменения в гематологических показателях, характеризующие подавление воспалительного процесса на фоне терапии. Влияние МР-7 и диклофенака натрия на динамику объема отека лапы у крыс с адъювантным артритом.

Заключение.Данные соединения являются перспективными кандидатами для разработки новых препаратов лечения ревматоидного артрита. МР-7 обладает выраженным противовоспалительным эффектом, который превосходит действие диклофенака натрия за счёт снижения уровней ключевых провоспалительных цитокинов и нормализации гематологических показателей. Совместное применение МР-7 с другими противовоспалительными средствами усиливает терапевтический эффект. Полученные результаты подтверждают необходимость дальнейших доклинических и клинических исследований для оценки безопасности и эффективности данных соединений.

Список литературы:

1. Abdukahhor D., Turgunov T., Baltaev A., Yakubkhodjaeva M. Synthesis of 1,2,3-triazoles based on propargyl ethers of carbamate // Chemistry and Chemical Engineering. – 2020. – Vol. 2020, No. 2. – P. 8–14.
2. Балтабаев У.А., Хаитов Ш.Н., Тургунов Т.Х. Противовоспалительная активность галогенсодержащих производных 1,2,3-триазолкарбаматов // The Theory of Recent Scientific Research in the Field of Pedagogy. – 2022. – Т. 1, № 4. – С. 140–143.
3. Brown R., Ahmed K., Soto F. NSAIDs and Their Impact on Cytokine Levels in Autoimmune Diseases // Autoimmune Reviews. – 2019. – Vol. 12, No. 5. – P. 88–92.
4. Calder P.C. Polyunsaturated fatty acids and inflammatory processes: new twists in an old tale // Biochimie. – 2009. – Vol. 91, No. 6. – P. 791–795.
5. Costenbader K.H., Kang J.F.L., Karlson E.W. Antioxidant intake and risks of rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus in women // American Journal of Epidemiology. – 2010. – Vol. 172, No. 2. – P. 205–216.
6. Green M., Thomas L., Wright S. Immunomodulatory effects of novel carbamate derivatives in rodent models of inflammation // Clinical Pharmacology Reports. – 2021. – Vol. 45, No. 3. – P. 230–236.
7. Мосесова Н.С., Ковалева В.Л., Ларенцова Л.И. Экспериментальное исследование противовоспалительных свойств мексидола // Сб. трудов III Всерос. науч.-практ. конф. «Образование, наука и практика в стоматологии». – Москва, 2006. – С. 108–110.
8. Smith J., Lee R., Patel M., Gonzalez L. Inflammation and Immunity in Rheumatoid Arthritis // Journal of Immunology and Therapy. – 2020. – Vol. 68, No. 4. – P. 412–419.
9. Шварц Г.Я., Сюбаев Р.Д. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов // Ведомости Научного центра экспертизы и госконтроля лекарственных средств МЗ РФ. – 2000. – № 1. – С. 44–50.
10. Якубходжаева М.Р. Синтез и биологическая активность 1,2,3-триазолов на основе ацетиленсодержащих производных карбаматов // MedUnion. – 2023. – Т. 2, № 1. – С. 282–291.