ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРОВОДОРОСЛЕЙ В УСЛОВИЯХ ЗАГРЯЗНЕНИЯ ИОНАМИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ МЕДИ, КОБАЛЬТА, КАДМИЯ И СВИНЦА

АННОТАЦИЯ

Установлено, что высокие концентрации меди (118 мг/л) и кобальта (285,5 мг/л)  в среде культивирования ингибируют рост и развитие исследуемых культур Сhlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25. Так, при высоких концентрациях меди и кобальта образование биомассы Сhlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25 снижается  на 62,7% и 66%  и 64,5% и 62,5%, соответственно по отношению к контролю. Показано, что концентрации кадмия (1,64 мг/л) и свинца (19,2 мг/л) незначительно влияют на рост Сhlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25. Выявлено значительное снижение биосинтеза хлорофилла А и каротиноидов в клетках исследованных культур в зависимости от концентраций тяжелых металлов в среде культивирования. Выраженный ингибирующий эффект образования хлорофилла и каротиноидов наблюдался при высоких концентрациях тяжелых металлов. В частности, у культуры Chlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25 при концентрации Cu²⁺ – 118 мг/л, Cd – 8,2 мг/л и Pb²⁺ – 95,9 мг/л образование хлорофилла А снижается на 37,7%, 46%, 31,5% и 50,7%, 63,6%, 32,57%, соответственно. Следует отметить, что более низкие концентрации кобальта (119,2 мг/л) оказывают стимулирующее действие на образование хлорофилла А (19,2%) в варианте Chlorella vulgaris 4 по отношению к контролю. При концентрации 95,9 мг/л свинца, образование каротиноидов у Chlorella vulgaris 4 и Anabaena variаbilis 21 увеличивается на 77,6% и 16,6%. При концентрации Cd²⁺ – 8,2 мг/л, образование каротиноидов у Chlorella vulgaris 4, Nostoc calcicola 25 и Anabaena variаbilis 21 снижается на 46,6%, 62,06 и 55%, соответственно.

ABSTRACT

It was found that high concentrations of copper (118 mg/l) and cobalt (285.5 mg/l) in the cultivation medium inhibit the growth and development of the studied cultures Chlorella vulgaris 4 and Nostoc calcicola 25. Thus, at high concentrations of copper and cobalt, the formation of biomass Chlorella vulgaris 4 and Nostoc calcicola 25 are reduced by 62.7% and 66% and 64.5% and 62.5%, respectively, relative to the control. It was shown that the concentrations of cadmium (1.64 mg/l) and lead (19.2 mg/l) have a slight effect on the growth of Chlorella vulgaris 4 and Nostoc calcicola 25. A significant decrease in the biosynthesis of chlorophyll A and carotenoids was revealed in the cells of the studied cultures in depending on the concentrations of heavy metals in the cultivation medium. A pronounced inhibitory effect on the formation of chlorophyll and carotenoids was observed at high concentrations of heavy metals. In particular, in the culture of Chlorella vulgaris 4 and Nostoc calcicola 25 at a concentration of Cu2+ - 118 mg/l, Cd - 8.2 mg/l and Pb2+ - 95.9 mg/l, the formation of chlorophyll A decreases by 37.7%, 46% , 31.5% and 50.7%, 63.6%, 32.57%, respectively. It should be noted that lower concentrations of cobalt (119.2 mg/l) have a stimulating effect on the formation of chlorophyll A (19.2%) in the Chlorella vulgaris 4 variant compared to the control. At a concentration of 95.9 mg/l lead, the formation of carotenoids in Chlorella vulgaris 4 and Anabaena variabilis 21 increases by 77.6% and 16.6%. At a Cd2+ concentration of 8.2 mg/l, the formation of carotenoids in Chlorella vulgaris 4, Nostoc calcicola 25 and Anabaena variabilis 21 decreases by 46.6%, 62.06 and 55%, respectively.

Ключевые слова: тяжелые металлы, микроводоросли, цианобактерии, биомасса, Cu(II), Cd(II), Со(II), Pb(II), хлорофилл, каротиноиды.

Keywords: heavy metals, microalgae, cyanobacteria, biomass, Cu(II), Cd(II), Co(II), Pb(II), chlorophyll, carotenoids.

Введение

Загрязнение водных ресурсов, почвы тяжелые металлами (ТМ) вызывает серьезную глобальную озабоченность [1, 2]. Проблемы загрязнения становятся все более серьезными в результате роста индустриализации, урбанизации и численности населения, а также их косвенных последствий для всей экосистемы. ТМ выбрасываются в окружающую среду в результате природных процессов, включая ветер и наводнения, а также антропогенной деятельности [3]. ТМ не поддаются биологическому разложению, имеют пагубное воздействие как на экосистему, так и на здоровье человека [4, 5]. ТМ, такие как мышьяк, ртуть, хром, никель, свинец, кадмий, цинк и железо, токсичны для жизни, если их концентрации превышают определенное допустимое количество. В таких случаях эти загрязнения способны проникать глубоко в слой подземных вод и загрязнять как грунтовые, так и поверхностные воды. Тяжелые металлы, находящиеся в почве, впоследствии попадают в пищевую цепь человека через растения. Попадая в пищевую цепь, эти ТМ нарушают биологические процессы и, следовательно, представляют серьезную угрозу для здоровья человека [6, 7]. Различные традиционные методы удаления ТМ из загрязненных участков включают электролитические технологии, ионный обмен, осаждение, химическую экстракцию, гидролиз, полимерное микрокапсулирование и выщелачивание [8]. Однако основная проблема заключается в том, что большинство этих методов неэффективны, дороги при применении к крупномасштабным проектам и требуют тщательного контроля и постоянного мониторинга. Поэтому биологическая очистка (биоремедиация) рекомендуется как альтернативный и экологически чистый подход к эффективному удалению ТМ из загрязненных мест [9, 10].

Использование живой или мертвой биомассы считается одним из наиболее эффективных, экономичных и перспективных биосорбентов для удаления ТМ из окружающей среды из-за обилия биомассы в природе и ее быстрого роста, а также простоты их выращивания [11]. Сообщается, что водоросли на 15,3% больше используются в качестве сырья для биосорбентов, чем другие виды биомассы (активированный уголь или активный ил) и на 84,6% больше, чем грибы и бактерии [12].

Исходя из вышесказанного целью данной работы является определение образования биомассы, хлорофилла и продукции каротиноидов у местных штаммов микроводорослей в присутствии различных концентраций меди, кобальта, кадмия и свинца.

Материалы и методы исследования

Объекты исследования

Объектами исследования являются местные штаммы цианобактерий Nostoc calcicola 25, Anabaena variabilis 21 и одноклеточные зеленые водоросли Chlorella vulgaris 4 [13-15].

Культивирование микроводорослей

Для культивирования цианобактерий и одноклеточных зеленых водорослей использовали жидкие среды ВG -11₀ и Чу-13. Среды наливали в стеклянные колбы (300 – 500 мл) таким образом, чтобы занимаемый объем был не более ¹/₃ – ¹/₄ объема колбы. Сосуды с засеянным материалом помещали на свет с люминесцентными лампами, при 2500 люкс, температуре – 28^оС и концентрации СО₂ – 2%.

Определение сухого веса биомассы микроводорослей

Определение сухого веса биомассы микроводорослей проводилось согласно методике [16]. Стеклянные бюксы помещали в сушильный шкаф и сушили в течение 2 ч при температуре 110°С. Затем бюксы вынимали пинцетом из сушильного шкафа и переносили в эксикатор с безводным CaCl₂. Через 1 ч бюксы взвешивали с точностью до 0,1 мг. Высушивание и взвешивание повторяли с соблюдением указанной последовательности операций, пока масса не достигала постоянного значения, то есть колебания в ее определениях не превышали ± 0,1 мг.

Определение содержания хлорофиллов и каротиноидов в экстрактах микроводорослей

Определение содержания хлорофиллов и каротиноидов проводили спектрофотометрическим методом [17].

Для этого пробу суспензии микроводорослей объемом 50 мл центрифугировали при 5000×g в течение 10 минут. Над осадочную жидкость удаляли, а пигменты экстрагировали из осадка 100%-ным ацетоном с обрабатыванием 3 раза по одной минуте ультразвуковым диспергатором. После обработки смесь экстракта ещё раз центрифугировали (5 мин при 3000 g) для отделения белых остатков клеток от пигментного экстракта. Светопропускание прозрачного экстракта измеряли на спектрофотометре V-5000 VIS (Shanghai Metash Instruments CO., LTD, Китай) при следующих длинах волн (440,5, 644 и 662 нм с шагом 0,1 нм) в кварцевых кюветах. Плотность пигмента в образце была рассчитана в соответствии со следующими уравнениями (по Хольму – Веттштейну).

C_хл.a= 9,784D₆₆₂ – 0,990 D₆₄₄;

C_хл.b = 21,426D₆₄₄ – 4,650D₆₆₂;

C_хл.a+ _хл.b = 5,134D₆₆₂ + 20,436D₆₄₄;

C_кар = 4, 695D_440,5 – 0,268C_хл.a+ _хл.b;

При этом по формуле Хольма – Веттштейна вычитывают концентрацию пигментов в экстракте в мкг/мл.

В установлении достоверности результатов опытов при подсчёте линейного отклонения, среднего отклонения, при подсчёте интервалов достоверности использован t-критерий Стьюдента и компьютерные программы STATISTICA 6.0.

Результаты и их обсуждение

Ранее нами были выделены местные штаммы микроводорослей из засоленных почв Кашкадарьинской и Сырдарьинской областей Узбекистана Nostoc calcicola 25, Anabaena varibilis 21 и Сhlorella vulgaris 4 (рис.1) [13-15].

Рисунок 1. Микрофотографии местных штаммов микроводорослей и цианобактерий: а) Chlorella vulgaris 4; б) Nostoc calcicola 25; в) Anabaena varibilis 21 (Увеличение:100 х 13,5)

В данной работе проведены исследования по определению образования биомассы, хлорофилла и каротиноидов данными штаммами микроводорослей в присутствии различных концентраций меди, кобальта, кадмия и свинца. Изучено действие возрастающей концентрации меди, кобальта, кадмия и свинца, на плотность клеток зеленой микроводоросли Сhlorella vulgaris 4 и цианобактерий Nostoc calcicola 25. Экспозиция культур Сhlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25 в течение 7 сут с различными концентрациями Cu²⁺, Со²⁺, Cd²⁺ и Pb2+ выявила экспоненциально отрицательную взаимосвязь между сухой массой водорослей и количеством металла в культуральной среде. Так, обнаружено уменьшение плотности клеток с увеличением концентрации металла в растворе (рис.2). При этом потеря продуктивности биомассы составляет 16,3% и 21%, при росте в присутствии Cu²⁺ (23,6 мг/л) и Со²⁺ (47,68 мг/л), соответственно. С другой стороны, выявлено, что более высокие концентрации Cu²⁺ (118,0 мг/л) и Со²⁺ (238,5 мг/л) значительно влияют на плотность клеток Сhlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25.  Установлено, что наиболее высокие концентрации меди и кобальта в среде культивирования ингибируют рост и развитие исследуемых культур Сhlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25. Так, при высоких концентрациях меди и кобальта образование биомассы Сhlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25 снижается на 62,7% и 66% и 64,5% и 62,5%, соответственно (риc.2). Также было выявлено, что более низкие концентрации кадмия (1,64 мг/л) и свинца (19,2 мг/л) незначительно влияют на рост Сhlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25. Следовательно, более высокие концентрации этих металлов значительно снижают продуктивность культур. Так, при концентрациях Cd²⁺ (8,2 мг/л) и Pb²⁺ (95,9 мг/л) продуктивность Сhlorella vulgaris 4 ингибируется на 76% и 75%, соответственно. При этих же концентрациях образование биомассы культурой Nostoc calcicola 25 снижается на 69,2% и 67,8% (рис.2).

Рисунок 2. Продуктивность биомассы у микроводорослей при различных концентрациях тяжелых металлов: Сu²⁺, Со²⁺, Cd²⁺, Pb²⁺

Таким образом, вероятно, ингибирование роста одноклеточных микроводорослей и цианобактерий связано с токсичностью металлов и именно с количеством металла, связанного с поверхностью клеток водорослей и с химической природой металла.

Ионы ТМ, которые обычно тестируются на поглощение - это Сu²⁺, Со²⁺, Cd²⁺, Pb²⁺ считаются одними из самых распространенных загрязняющих веществ в природных экосистемах. Cd и Pb, будучи высокотоксичными металлами, необязательны для роста и развития растительных организмов, но Cu, хотя и необходимый микроэлемент, в повышенных концентрациях также может нанести вред организмам. Высокое содержание Cd в среде приводит к значительному торможению роста и фотосинтеза, выражая его токсическое действие за счет комплексообразования с SH-группами белков и угнетения клеточного дыхания. Избыток Pb вызывает замедление роста и хлороз, угнетает фотосинтез, питание и водный баланс [18].

Исходя из этого, нами была исследовано влияние ТМ на содержание хлорофилла и каротиноидов у местных штаммов микроводорослей и цианобактерий. Как отмечалось ранее, что все изученные ТМ (Cu²⁺, Со²⁺, Cd²⁺, Pb²⁺) при наиболее высоких концентрациях подавляли рост Chlorella vulgaris 4, Nostoc calcicola 25 и Anabaena varibilis 21 (рис.2).

Далее сравнивалась реакция на ТМ синтеза хлорофилла и каротиноидов микроводорослями Chlorella vulgaris 4, цианобактерий Nostoc calcicola 25 и Anabaena varibilis 21. Выявлено значительное снижение биосинтеза хлорофилла и каротиноидов в клетках исследованных культур в зависимости от концентраций ТМ в среде культивирования. Выраженный ингибирующий эффект образования хлорофилла и каротиноидов наблюдался при высоких концентрациях ТМ. В частности, у культуры Chlorella vulgaris 4 и Nostoc calcicola 25 при концентрации Cu²⁺ - 118 мг/л, Cd²⁺ - 8,2 мг/л и Pb²⁺ - 95,9 мг/л образование хлорофилла А снижается на 37,7%, 46%, 31,5% и 50,7%, 63,6%, 32,57%, соответственно (рис.3). Следовательно, сильное ингибирующее действие на образование хлорофилла А оказывают высокие концентрации ионов кадмия. Следует отметить, что низкая концентрация кобальта (119,2 мг/л) оказывает стимулирующее действие на образование хлорофилла А (19,2%) в варианте Chlorella vulgaris 4 по сравнению с контролем.

Рисунок 3. Влияние тяжелых металлов (Cu²⁺, Со²⁺, Cd²⁺, Pb²⁺) на содержание хлорофилла и каротиноидов у микроводорослей и цианобактерий (10 суток)

Микроводоросли являются источником ценных соединений, таких как липиды, пигменты, углеводы, витамины и белки, которые могут применяться во многих отраслях промышленности. В настоящее время исследования сосредоточены на улучшении синтеза и максимальном производстве ценных соединений из культур микроводорослей. Клетки микроводорослей способны синтезировать многочисленные соединения в больших количествах в ответ на стрессовые условия, такие как высокая температура, высокая соленость, нехватка питательных веществ, а также высокие концентрации металлов [19].

В некоторых случаях наблюдается стимулирование образования каротиноидов у исследуемых культур Chlorella vulgaris 4 и Anabaena variаbilis 21 в присутствии ионов Pb²⁺. Так, при концентрации 95,9 мг/л свинца, образование каротиноидов у  Chlorella vulgaris 4 и Anabaena variаbilis 21 увеличивается на 77,6% и 16,6%. А у культуры Nostoc calcicola 25 образование каротиноидов повышается при концентрации свинца 48 мг/л на 10,34% (рис.3).

Следует отметить, что высокие концентрации ионов ТМ Сu²⁺ (118мг/л) и Cd²⁺ (8,2 мг/л) ингибируют образование каротиноидов у микроводорослей и цианобактерий. В частности, при концентрации Cd²⁺ (8,2 мг/л) образование каротиноидов у Chlorella vulgaris 4, Nostoc calcicola 25 и Anabaena variаbilis 21 снижается на 46,6%, 62,06 и 55%, соответственно.

Заключение

Одноклеточные и фотоавтотрофные организмы – микроводоросли, могут уменьшить выбросы углекислого газа. Они имеют большую удельную поверхность и функциональные группы на поверхности клеток, обладающие способностью связывать ионы ТМ [20]. В свою очередь, ионы ТМ могут оказывать вредное действие на микроводоросли, которые заключается в изменении физиологических и биохимических процессов в клетках, что приводит к снижению роста, ограничению фотосинтеза, изменению ультраструктуры клеток, уменьшению содержания белка и изменению состава жирных кислот. Известно, что хлорофиллы, каротиноиды и фикобилины представляют собой пигменты микроводорослей. Хлорофиллы являются первичными фотосинтетическими пигментами, содержащими циклы тетрапиррольного макроцикла и присутствующими в различных формах (a, b, c1, c2, c3, d, f), в клетках микроводорослей или цианобактерий. Зеленые микроводоросли содержать до 6,7% хлорофилла. Кроме того, ионы Mg²⁺ в составе хлорофилла могут быть замещены на ионы Zn²⁺, Ni²⁺, Cd²⁺, Pb²⁺, Co²⁺ или Pt²⁺ [21]. Каротиноиды – вспомогательные фотосинтетические пигменты, представляют собой жирорастворимые тетратерпеноидные молекулы, которые делятся на не кислородсодержащие каротины (β-каротин) и кислородсодержащие ксантофиллы (лютеин, астаксантин, зеаксантин). Антропогенное действие, развитие промышленности и естественные земные процессы приводят к накоплению высоких концентраций металлов (Fe, Zn, Cu, Cd, Cr, Ni, Hg, Pb, La, Li, V), металлоидов (As, Te) и металлических наночастиц (Ag, Pt, TiO2, ZnO, CeO2, NiO, BaTiO₃, Y₂O₃, Al₂O₃), которые могут действовать как стрессоры или модуляторы для роста и метаболизма микроводорослей. Вероятно, ингибирование роста одноклеточных микроводорослей и цианобактерий тесно связано с токсичностью металлов и концентрацией на поверхности клеток водорослей и с химической природой металла. Следовательно, более высокие концентрации исследованных металлов значительно снижают продуктивность культур, а также биосинтеза хлорофилла и каротиноидов.

Список литературы:

1. Kilaru Harsha Vardhan, Ponnusamy Senthil Kumar, Rames C. Panda, A review on heavy metal pollution, toxicity and remedial measures: Current trends and future perspectives, Journal of Molecular Liquids, Volume 290, 2019, 11119. doi.org/10.1016/j.molliq.2019.111197
2. Paulina A. Kobielska, Ashlee J. Howarth, Omar K. Farha, Sanjit Nayak, Metal–organic frameworks for heavy metal removal from water, Coordination Chemistry Reviews. –2018. –V.358. –P. 92-107.
3. Gupta A, Joia J, Sood A, Sood R, Sidhu C Microbes as potential tool for remediation of heavy metals: a review. J Microb Biochem Technol. –2016. –V.8. –P.364–372.
4. Alqadami AA, Khan MA, Otero M, Siddiqui MR, Jeon B-H, Batoo KM A magnetic nanocomposite produced from camel bones for an efficient adsorption of toxic metals from water. J Clean Prod. –2018. –V.178. –P.293–304.
5. Kwaansa-Ansah EE, Nti SO, Opoku F Heavy metals concentration and human health risk assessment in seven commercial fish species from Asafo Market, Ghana. Food Sci Biotechnol. –2019. –V.28. –P.569–579.
6. Leong YK, Chang JS. Bioremediation of heavy metals using microalgae: Recent advances and mechanisms. Bioresour Technol. 2020 May; 303:122886. doi: 10.1016/j.biortech.2020.122886.
7. Nasir Hussain, Kiran Shafiq Ahmed, Asmatullah, Muhammad Shafiq Ahmed, Syed Makhdoom Hussain, Arshad Javid Potential health risks assessment cognate with selected heavy metals contents in some vegetables grown with four different irrigation sources near Lahore, Pakistan, Saudi Journal of Biological Sciences, Volume 29, Issue 3, 2022, P. 1813-1824. doi.org/10.1016/j.sjbs.2021.10.043.
8. Jais NM, Mohamed R, Al-Gheethi A, Hashim MA The dual roles of phycoremediation of wet market wastewater for nutrients and heavy metals removal and microalgae biomass production. Clean Technol Environ Policy. –2017. –V.19. –P.37–52.
9. Усмонкулова А.А., Кадырова Г.Х., Садуллаева М.С., Нармухаммедова М.К., Кадирова А.Ф., Шонахунов Т.Э. Морфологические и биохимические особенности бактерий при стрессе тяжелых металлов // Universum: химия и биология: электрон. научн. журн, Выпуск: 12(102), 2022, Часть 1. C. 31-37.
10. Usmonqulova A.A., Kadirova G.X., Sadullayeva M.S., To`raqulova D.E., Shonaxunov T.E. Bioremediatsiya pochv bakteriyami, zagryaznennykh kationami Cd(II) // International scientific journal science and innovation. 2023. С.583-589. https://doi.org/10.5281/zenodo.8361809
11. Sulaymon, A.H.; Mohammed, A.; Al-Musawi, T. Column biosorption of lead, cadmium, copper, and arsenic ions onto algae. J. Bioproces Biotechniq. –2013. –V.3. –P.128.
12. Ioannis Anastopoulos, George Z. Kyzas, Progress in batch biosorption of heavy metals onto algae, Journal of Molecular Liquids. –2015. –V. 209. –P. 77-86. https://doi.org/10.1016/j.molliq.2015.05.023.
13. Кадырова Г.Х. Таксономия и некоторые свойства местных азотфиксирующих цианобактерий рода Nostoc // Доклады АН РУз. –Ташкент, 2012. №1. –С.71-75.
14. Kadirova G.Kh., Z.S.Shakirov Identification of nitrogen-fixing and salt-resistant cyanobacteria Nostoc calcicola isolated from the rhizosphere of cotton in Uzbekistan // Environmental Science An Indian Journal, 2012. Vol. 7, Issue 8. Р.305-309.
15. Кадырова Г.Х., Коробкова Е.С. Идентификация цианобактерий рода Anabaena выделенных из ризосферы хлопчатника //Украинский микробиологический журнал. –Киев, 2013. –Т.75. –№1. –С.27-32.
16. Пименова М. Н., Гречушкина Н. Н., Азова Л. Г., Нетрусов А. И., Семенова Е. В., Колотилова Н. Н., Захарчук Л. М., Зинченко В. В., Мыльникова С. И., Нефедова М. В., Ботвинко И. В. Руководство к практическим занятиям по микробиологии / Под ред. Егорова Н.С. М.: Изд. МГУ. – 1995. – 224 с.
17. Сиренко Л.А., Сакевич А.И., Осипов Л.Ф., Лукина Л.Ф. и др. Методы физиолого-биохимического исследования водорослей в гидробиологической практике. Киев. Наукова Думка. 1975. 247 с.
18. Dao L, Beardall J Effect of lead on two green microalgae Chlorella and Scenedesmus: Photosystem II activity and heterogeneity. Algal Research –2016. –V.16. –P.150–159. https://doi.org/10.1016/j.algal.2016.03.006
19. Karcheva Z, Georgieva Z, Tomov A, Petrova D, Zhiponova M, Vasileva I, Chaneva G Heavy metal stress response of microalgal strains Arthronema africanum and Coelastrella sp. BGV. In: Chankova S, Peneva V, Metcheva R, Beltcheva M, Vassilev K, Radeva G, Danova K (Eds) Current trends of ecology. BioRisk. –2022. –V.17. –P.83–94. https://doi.org/10.3897/biorisk.17.77483
20. Hamed SM, Selim S, Klöck G, AbdElgawad H (2017) Sensitivity of two green microalgae to copper stress: Growth, oxidative and antioxidants analyses. Ecotoxicol Environ Saf 144:19–25. https:// doi.org/10.1016/j.ecoenv.2017.05.048
21. Miazek Krystian, Iwanek Waldemar, Remacle Claire, Richel Aurore and Dorothee Goffin Effect of Metals, Metalloids and Metallic Nanoparticles on Microalgae Growth and Industrial Product Biosynthesis: A Review. J. Mol. Sci. 2015. V.16. P.23929-23969. doi:10.3390/ijms161023929