БИОМАРКЕРЫ И ОЦЕНКА РИСКОВ

АННОТАЦИЯ

Биомониторинг, основанный на химическом анализе тканей, биологических жидкостей, выдыхаемого воздуха и прочих выделений организма, предпринимается для получения данных о взаимодействии химических веществ с биологическими системами. Определение количественных показателей таких веществ, которые потенциально могут выполнять функцию биомаркеров, имеет важное значение для оценки риска, так как позволяет получать данные о связи этих веществ с функциональным состоянием организма.

В статье представлен обзор современных достижений и тенденций развития методов неинвазивной диагностики функционального состояния организма человека по запахам выдыхаемого воздуха и выделений (эманаций) с кожи человека с применением инструментального анализа.

ABSTRACT

Biomonitoring, based on the chemical analysis of tissues, biological fluids, exhaled air and other body secretions, is undertaken to obtain data on the interaction of chemicals with biological systems. The determination of quantitative indicators of such substances that can potentially perform the function of biomarkers is important for risk assessment, as it allows obtaining data on the relationship of these substances with the functional state of the body.

The article presents an overview of modern achievements and trends in the development of methods of noninvasive diagnostics of the functional state of the human body by the odors of exhaled air and secretions (emanations) from human skin using instrumental analysis.

Ключевые слова: Биомаркеры, оценка рисков, неинвазивная диагностика, запахи, выдыхаемый воздух, выделения с кожи.

Keywords: Biomarkers, risk assessment, noninvasive diagnostics, smeels, exhaled air, skin discharge.

Введение

По рекомендациям экспертов ВОЗ [1] под термином «биомаркер» следует считать «практически любой количественный показатель, отражающий взаимодействие между биологической системой и потенциальной опасностью, которая может быть химической, физической или биологической» [2].

Результаты количественных определений биомониторинга могут быть использованы для оценки экспозиции работающих на производстве, а в клинических условиях — для оценки эффективности применения терапевтических средств. Полученные при этом количественные показатели, или биомаркеры, позволяют установить связь между экспозицией к веществу, его внутренней дозой и нарушением здоровья, что очень ценно при оценке потенциальных рисков [3].

Использование же биомаркеров в клинической практике обусловливается необходимостью подтверждения диагноза острого или хронического отравления; оценки эффективности лечения; оценки прогноза у отдельных пациентов.

Однако, прежде чем биомаркеры можно будет использовать в этих целях, необходимо четко установить их связь с биологической системой.

Биомаркеры используют при скрининге и регулярном мониторинге, и их можно определять и применять как на индивидуальном, так и на популяционном уровне (в группе населения). При этом группы риска можно выявлять по отклонению от нормальных средних значений биомаркеров экспозиции или эффектов, а индивидуальные колебания их значений учитывать статистически.

При выборе методов лабораторных исследований необходимо учитывать, достаточны ли их точность и прецизионность, возможности обеспечения высокого качества лабораторных работ и контроля за ним, а также наличие автоматизированных или альтернативных простых, но специфичных методов. Затраты на квалифицированные кадры, оборудование и реагенты должны быть бюджетными и находиться в разумных пределах.

Предпочтение следует отдавать методам отбора проб и анализа, которые были бы:

• неинвазивными;

• репрезентативными, т.е. следует учитывать время между экспозицией и анализом проб;

• обеспечивать стабильность анализируемого вещества в пробе.

К обычным пробам, подлежащим неинвазивному анализу, относятся пробы выдыхаемого воздуха, слюны, потовые и жировые выделения кожи, мочи, мокроты, ногтей с пальцев рук, волос, кала и зубной ткани (выпавшие зубы). Кроме того, клиники или больницы могут предоставить возможность для сбора проб уникальных жидкостей (например, фолликулярной, околоплодных вод, спермы), тканей, забираемых в процессе обследования пациента (например, материала цитологического исследования или бронхолегочного лаважа), биопсийного материала (например, жира) или материала, получаемого при вскрытии.

Для определения некоторых веществ invitvo к настоящему времени разработаны специальные методы, опирающиеся на огромный потенциал и возможности инструментальных методов анализа [4].

Биогенные запахи могут быть вызваны эндогенными и экзогенными, и содержать как вещества неорганической, так и органической природы, например, летучие органические соединения (ЛОС), являющиеся эманацией (выделением) организма человека. Их основные источники включают дыхание, слюну, пот, кожу, мочу, кал и вагинальные выделения. Запахи тела человека часто действуют как обонятельные сигналы, которые передают информацию о метаболическом или психологическом статусе человека [5,6].

На сегодняшний день более 300 летучих органических соединений были обнаружены в выдыхаемом воздухе в концентрациях всего лишь на уровне ppm и ppb, т.е. частей на уровне одной на миллион, или одной на миллиард по объему, соответственно.

Тем не менее, биогенетические пути большинства обнаруженных ЛОС в человеческом дыхании точно не выяснены, и органические соединения, найденные в дыхании, могут возникнуть из разных источников. Например, они могут быть связаны с эндогенными метаболическими процессами (например, ферментативное окисление или свободно- радикальное образование) или быть экзогенного происхождения за счет попадания в объект исследования внешних загрязнителей вместе с вдыхаемым воздухом или с продуктами питания [7-10].

Напротив, большинство летучих органических соединений, исходящих от поверхности кожи, могут быть собраны из пота, секретируемого потовыми железами (эккринными, сальными и апокринными). Такие образцы, как правило, отбираются в виде маслянистых веществ, выделяемых сальными железами из-под подмышечной впадины, области промежности и ареолы груди. Хотя некоторые из этих летучих органических соединений обусловлены внутренними гормональными или метаболическими изменениями и многие из них происходят от симбиотических бактерий, которые живут на поверхности кожи, метаболизируют и трансформируют эти выделения [11-14].

Таким образом, процесс формирования запаха тела зависит от взаимодействия между комменсальными бактериями с их каталитическими ферментами и уникальности пота человека -хозяина таких выделений. Кроме того, вещества в моче содержат промежуточные или конечные продукты нескольких метаболических путей, и попадают в различные структурные классы органических соединений: кетоны, спирты, фураны, пирролы и сульфиды, имеющие определенные специфические запахи. Любое изменение в гомеостатическом балансе, вызванном нарушением обмена веществ или бактериальная инфекция пораженного участка, может изменить как качество, так и количество ЛОС [5,13].

Целью настоящей работы является обзор современных достижений и тенденций развития неинвазивной диагностики ряда заболеваний и функционального состояния организма по запахам, исходящим из выдыхаемого воздуха, кожных покровов и других выделений человека.

Обсуждение и комментарии

В последнее время компоненты выдыхаемого воздуха или его конденсат, запахи кожи и мочи привлекают особое внимание исследователей как диагностические биомаркеры ряда инфекционных заболеваний [5], метаболомики [15] и других заболеваний, таких как рак [10,16-23], заболевания легких [16,24,25], сердечно-сосудистые заболевания [26], желудочно-кишечные заболевания и заболевания печени [18].

Различные человеческие запахи и эманации являются характерными для многих заболеваний и функциональных расстройств организма.

В таблице 1 приводится качественная оценка запахов, сопровождающих некоторые заболевания или нарушения метаболических процессов и связанных с летучими органическими соединениями, которые могут являться потенциальными биомаркерами этих функциональных изменений.

Таблица 1.

Запахи и летучие биомаркеры, связанные со здоровьем человека

Уже точно определено, что среди индикации ЛОС в выдыхаемом воздухе запах ацетона характерен для пациентов с диагнозом сахарного диабета, а аммиака у лиц, зараженных бактерией Helicobacter pylori.

В работах [26-33], в том числе и наших [34,35], представлены диагностические биомаркеры в выдыхаемом воздухе.

Интересно отметить, что сам процесс старения также связан с появлением конкретных соединений, характерных для, так называемого, запаха «пожилого человека»: 2-ноненаль, ненасыщенный альдегид с жирным и травянистым запахом, который был обнаружен в кожных эманациях стариков, и, очевидно, являющегося причиной старения [12].

Кроме того, отличительные запахи, исходящие из пораженного участка, наблюдались у некоторых пациентов с раковыми заболеваниями: такие как уксусная, изовалерияновая и / или масляная кислоты у женщин, больных раком, жалующихся на обильные вагинальные выделения.

Некоторые нарушения обмена веществ также связаны с характерными запахами из-за накопления пахучих метаболитов в организме, и эти запахи могут быть достаточно характерными, чтобы позволить установить диагноз клиницистами [5,12].

Различные микробы производят широкий спектр ЛОС в организме хозяина, и эти летучие вещества высвобождаются в дыхании, моче, кале и поте [7,23]. Среди пахучих соединений, вырабатываемых микроорганизмами - спирты, алифатические кислоты и терпены, и их концентрации находятся в определенных соотношениях с этими микроорганизмами.

Как было установлено, отравление определенными токсинами также влияет на запахи дыхания и мочи. Такие характерные запахи могут обеспечить подсказку диагноза и предотвратить клиническое ухудшение во время ожидания подтверждения лабораторным анализом.

Ранняя диагностика заболеваний с использованием эффективных методов скрининга имеют решающее значение для успешной терапии [3].

Как уже было отмечено, идеальным считается метод диагностики, сочетающий в себе неинвазивность, бесболезненность, дешевизну, простоту и легкую доступность для большинства пациентов.

Таким образом, неинвазивный анализ биомаркеров запахов и других эманаций человека, имеет многочисленные преимущества по сравнению с традиционными методами.

Действительно, клиницисты давно знают о специфических для болезни запахах, а также о возможном использовании профилей летучих соединений в качестве биомаркеров различных заболеваний [36, 37]. Факторы, ограничивающие использование этих соединений в качестве потенциальных биомаркеров, включают межиндивидуальные и внутри индивидуальные различия как следствие конкретных физиопатологических изменений, происходящих в определенный период времени, неоднозначные диагностические критерии и нечувствительность вследствие адаптации. Кроме того, на большое разнообразие запахов человека в биологических пробах могут влиять различные факторы, такие как возраст, пол, лекарственная терапия, диета, алкоголь и курение. Следовательно, необходимо соблюдать осторожность при дифференциации заболевания по запаху, а обонятельные методы ограничены в точной идентификации и количественной оценке.

Интересно, что обоняние животных, в ряде случаев, является диагностически полезным [10,22,38]. Широко известны примеры, когда домашние животные, к примеру, собаки, чья обонятельная чувствительность намного выше, чем у людей, предупредили своих владельцев о поражениях кожи, которые позже были диагностированы как меланома и базальноклеточный рак, были начаты своевременные исследования [38,39]. Однако, как показали эти исследования, собаки могли реагировать на запахи, только косвенно связанных с раком, такие как продукты воспаления, некроза и / или метаболизма, которые часто присутствуют у пациентов с запущенным заболеванием, а не специфически на запахи, вызванные самим раком.

Это вдохновило инженеров-конструкторов создать устройство типа «Электронный нос», содержащее полупроводниковые или химические датчики, включая оптические, термические пеллисторы, электрохимические и гравиметрические датчики для обнаружения и классификации запахов человека для рутинных клинических применений [39-42]. Электронный нос – чувствительное и многофункциональное устройство, позволяющее экспрессно, по методу insitu анализировать сложные по составу аналиты в следовых количествах, включая качественный и количественный анализ смесей без разделения на отдельные компоненты. Однако существуют и некоторые недостатки его использования, связанные с проблемами дрейфа сигнала, снижения чувствительности датчика с течением времени, недостаточная перекрестная селективность. Поэтому необходим селективный и чувствительный аналитический метод для выделения и количественного определения одорантов и летучих биомаркеров заболеваний.

Поскольку компоненты человеческих запахов и выделений часто присутствуют в очень низких концентрациях, их качественное и количественное определение требует подходящего отбора проб и предварительного концентрирования для достаточного обогащения целевых компонентов, чтобы соответствовать диапазону обнаружения общих аналитических данных системы.

Наиболее распространенными методами обогащения ЛОС являются твердофазная микроэкстракция (SPME) [43-45] и сорбция на твердых сорбентах с последующей термической десорбцией (TD) [6,10,46,47]. Обогащенные ЛОС могут быть впоследствии проанализированы и идентифицированы с помощью ГХ или ГХ-МС [15,20,48]. ГХ-МС также можно сочетать с ольфактометрией (ГХ-МС-О), что позволяет одновременно исследовать масс-спектры и запаховые свойства отдельных отдушек.

Методы прямого МС для онлайн-анализа в реальном времени включают реакцию переноса протона (PTR), селективную ионную трубку (SIFT), спектрометрию ионной подвижности (IMS), десорбцию ESI и прямой анализ в реальном времени (DART) [7,21].

Наборы для иммуноферментного анализа (EIA) также можно использовать для анализа субстратов выделений человека. Детали этих методов хорошо описаны в обзорах [10,20,22].

Заключение

Ранняя диагностика заболеваний имеет решающее значение для здоровья человека и успешной терапии. Поскольку запахи и выделения человека могут нести важную информацию о его здоровье, химический анализ этих биосубстратов позволяет выявить потенциальные биомаркеры при скрининге и мониторинге заболеваний. Любые изменения в гомеостатическом балансе способны изменить компоненты выдоха и выделений из кожи и могут быть индикаторными биомаркерами для диагностики различных заболеваний и нарушений обмена веществ. Выявление таких биомаркеров и определение их роли способствует ранней диагностике и успешному лечению.

Идеальный метод отбора проб должен быть простым, неинвазивным, поддаваться транспортировке, экономичным в подготовке образца к анализу, не содержать растворители и другие экстрагенты. При этом неинвазивный анализ летучих органических соединений, специфичных для заболевания, в эманации человека может привести к лучшему пониманию патологических механизмов, вызывающих конкретное заболевание.

Хотя для неинвазивного анализа летучих органических соединений в выдыхаемом воздухе и эманации уже разработаны различные аналитические методы, эти методы еще не получили широкого распространения из-за их многочисленных технологических ограничений при отборе проб, концентрировании и проведении инструментального анализа.

Для решения этих проблем существует острая необходимость в разработке практичных и простых устройств для отбора проб и высокоэффективных методов их концентрирования, например, твердофазной микроэкстракции, сфера применения которой, в ближайшем будущем расширится благодаря разработке smart-материалов для микроэкстракции и лучшей интеграции высокопроизводительного отбора и подготовки проб к инструментальному анализу.

Список литературы:

1. Биомаркеры и оценка риска. Kонцепция и принципы. – Женева: Всемирная организация здравоохранения, 1996.
2. Сайко О.В., Мошкин М.П., Балдин М.Н., Грузнов В.М., Козлов В.А., Самороков С.Н., Деменков П.С., Иванисенко В.А., Колчанов Н.А. PROMEDIA – база данных химических соединений, потенциальных биомаркеров заболеваний, имеющих значение для неинвазивной диагностики // Математическая биология и биоинформатика. -2011. -Т. 6. -№ 2. -С. 250-263. URL: http://www.matbio.org/2011/Saik2011
3. Hiroyuki Kataoka, Keita Saito, Hisato Kato, Kazufumi Masuda. Noninvasive analysis of volatile biomarkers in human emanations for health and early disease diagnosis // Bioanalysis. – 2013. - # 5(11). -P. 1443–1459.
4. Вакс В.Л., Домрачева Е.Г., Собакинская Е.Л., Черняева М.Б. Анализ выдыхаемого воздуха: физические методы, приборы и медицинская диагностика // Успеxи физических наук -2014.-т.184. -№7. – С.739-758.
5. Shirasu M., Touhara K. The scent of disease: volatile organic compounds of the human body related to disease and disorder //J. Biochem.-2011.-Vol. 150(3). – P. 257–266.
6. Pandey S.K., Kim K-H. Human body-odor components and their determination //Trends Anal. Chem. – vol. 30(5). – P. 784–796.
7. Wang C., Sahay P. Breath analysis using laser spectroscopic techniques: breath biomarkers, spectral fingerprints, and detection limits // Sensors (Basel). – 2009.-# 9(10). P. 8230–8262.
8. Porter S.R. Diet and halitosis //J. Oral Pathol. Med.-2011.-Vol.14.–P. 463–468.
9. Španěl P., Smith D. Volatile compounds in health and disease // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care -2011.-Vol.14(5).-P. 455–460.
10. Buszewski B., Rudnicka J., Ligor T., Walczak M., Jezierski T., Amann A. Analytical and unconventional methods of cancer detection using odor // Trends Anal. Chem.- 2012.-Vol. 38. –P.1–12 .
11. Popov T.A. Human exhaled breath analysis //Ann. Allergy Asthma Immunol.- 2011.-Vol. 106(6). – P. 451–456.
12. Kippenberger S., Havlíček J., Bernd A., Thaçi D., Kaufmann R., Meissner M. ‘Nosing around’ the human skin: what information is concealed in skin odour? // Exp. Dermatol.- 2012. –Vol. 21(9). – P. 655–659.
13. Barzantny H., Brune I., Tauch A. Molecular basis of human body odour formation: insights deduced from corynebacterial genome sequences // Int. J. Cosmet. Sci. – 2012.-Vol.34(1). – P. 2–11.
14. Noël F., Piérard-Franchimont C., Piérard G.E., Quatresooz P. Sweaty skin, background and assessments//Int. J. Dermatol.-2012.-Vol.51(6).–P.647–655.
15. Turner M.A., Guallar-Hoyas C, Kent A.L., Wilson I.D., Thomas C.L.P. Comparison of metabolomics profiles obtained using chemical ionization and electron ionization MS in exhaled breath //Bioanalysis.- 2011. -# 3(24)-P. 2731–2738.
16. Grob N.M., Aytekin M., Dweik R.A. Biomarkers in exhaled breath condensate: a review of collection, processing and analysis// J. Breath Res. - 2008 2(3), 037004.
17. Horváth I., Lázár Z., Gyulai N., Kollai M., Losonczy G. Exhaled biomarkers in lung cancer // Eur. Respir. J. – 2009.-Vol. 34(1).-P. 261–275.
18. Probert C.S., Ahmed I., Khalid T., Johnson E., Smith S., Ratcliffe N. Volatile organic compounds as diagnostic biomarkers in gastrointestinal and liver diseases// J. Gastrointestin. Liver Dis. – 2009. –Vol. 18(3).-P.337–343.
19. Dahl M., Nordestgaard B.G. Markers of early disease and prognosis in COPD // Int. J. Chron. Obstruct. Pulmon. Dis. – 2009. - #4.-P. 157–167.
20. Kouremenos K.A., Johansson M., Marriott P.J. Advances in gas chromatographic methods for the identification of biomarkers in cancer // J. Cancer. – 2012. -# 3. – P. 404–420.
21. Badjagbo K. Exhaled breath analysis for early cancer detection: principle and progress in direct mass spectrometry techniques // Clin. Chem. Lab. Med.- 2012. – Vol. 50(11). P. 1893–1902.
22. Luque de Castro M.D., Fernández-Peralbo M.A. Analytical methods based on exhaled breath for early detection of lung cancer // Trends Anal. Chem. – 2012. –Vol.38. – P. 13–20.
23. Duffy E., Morrin A.     Endogenous and microbial volatile organic compounds in cutaneous health and disease / https:// www.researchgate.net /publication/343333501
24. van de Kant K.D., van der Sande L.J., Jöbsis Q., van Schayck O.C., Dompeling E. Clinical use of exhaled volatile organic compounds in pulmonary diseases: a systematic review //  Respir. Res.. -2012.-# 13. – P. 117.
25. Zhou M., Liu Y., Duan Y. Breath biomarkers in diagnosis of pulmonary diseases. //  Clin. Chim. Acta. – 2012. – Vol. 413(21–22). –P. 1770–1780.
26. Cikach F.S. Jr., Dweik R.A. Cardiovascular biomarkers in exhaled breath. Prog. Cardiovasc. Dis. – 2012. – Vol.55(1). – P.34–43.
27. Лукаш С.Л. Проблемы диагностики некоторых заболеваний по выдыхаемому воздуху // Комп’ютернізасоби, мережі та системи. - 2010, № 9 – С.62-70.
28. Копылов Ф.Ю. Перспективы диагностики различных заболеваний по составу выдыхаемого воздуха // Клиническая медицина. -2013. -№ 10. – С. 16-21.
29. Wang Z., Wang C. Is breath acetone a biomarker of diabetes? A historical review on breath acetone measurements // J. Breath Res.-2013. – Vol. 7. doi: 10.1088/1752-7155/7/3/037109
30. Bajtarevic A., Ager C., Pienz M., Klieber M., et.al. Noninvasive detection of lung cancer by analysis of exhaled breath // BMC Cancer. – 2009. – 9. – P.348./  doi: 10.1186/1471-2407-9-348
31. Das S., Palz M. Review—Non-Invasive Monitoring of Human Health by Exhaled Breath Analysis: A Comprehensive Review // Journal of The Electrochemical Society. - 2020. –Vol. 167. – 037562.
32. Turner C., Španěl P., Smith D. A longitudinal study of methanol in the exhaled breath of 30 healthy volunteers using selected ion flow tube mass spectrometry // SIFT-MS. Physiol. Meas.- 2006. –Vol.27. – P. 637.
33. Rosa A. Sola Martinez, Jose M. Pastor Hernandez, et.al. Exhaled volatile organic compounds analysis in clinical pediatrics: a systematic review // Pediatric Research. – 2021. –Vol. 89. – P. 1352-1363.
34. Раимкулова Ч. А., Аронбаев С. Д., Аронбаев Д. М. Анализ выдыхаемого воздуха как метод неинвазивной диагностики // International scientific journal «Global science and innovations 2020: Central Asia» Nur-Sultan, Kazakhstan, 2020. – С.56-58.
35. Raimkulova C.A., Aronbaev S.D., VasinaS.M. Aronbaev D.M.. Exhaled air as an object of studying the functional state of the organism The Austrian Journal of Technical and Natural Sciences, 2020- №1-2.-С.47-51.
36. Morad K. Nakhleh, Haitham Amal, Raneen Jeries, Yoav Y. Broza, Manal Aboud, Alaa Gharra, Hodaya Ivgi, Salam Khatib et.al. Diagnosis and Classification of 17 Diseases from 1404 Subjects via Pattern Analysis of Exhaled Molecules //ACS Nano. -  2017. - # 11.- P. 112−125 / DOI: 10.1021 / acsnano.6b04930.
37. de Lacy Costello B., Amann A., Al-Kateb H., Flynn C., et.al. A re-view of the volatiles from the healthy human body // Journal of Breath Research. -2014.- Vol. 8. - # 1 / DOI: 10.1088/1752-7155/8/1/014001
38. Lippi G., Cervellin G. Canine olfactory detection of cancer versus laboratory testing: myth or opportunity? // Clin. Chem. Lab. Med.-2012.-Vol. 50(3), P. 435–439.
39. Sonoda H., Kohnoe S., Yamazato T. et. al. Colorectal cancer screening with odour material by canine scent detection //Gut.-2011.-Vol 60. – P. 814–819.
40. Wilson A.D., Baietto M. Advances in electronic-nose technologies developed for biomedical applications//Sensors (Basel).–2011.-Vol.11(1)- P.1105–1176.
41. Brattoli M., de Gennaro G., de Pinto V., Loiotile A.D., Lovascio S., Penza M. Odour detection methods: olfactometry and chemical sensors // Sensors (Basel). – 2011. –Vol.11(5). – P. 5290–5322.
42. Kelly E. van Keulen,, Maud E. Jansen, Ruud W. M. Schrauwen, et.al. Volatile organic compounds in breath can serve as a non- invasive diagnostic biomarker for the detection of advanced adenomas and colorectal cancer // AP&T Alimentary Pharmacology & Therapeutics.– 2020.-Vol. 51(3). –P.334-346.
43. Kataoka H. Recent developments and applications of microextraction techniques in drug analysis//Anal.Bioanal.Chem.-2010.-Vol.396(1).-P.339–364.
44. Kataoka H, Saito K. Recent advances in SPME techniques in biomedical analysis // J. Pharm. Biomed. Anal.- 2011.-Vol. 54(5).-P. 926–950.
45. Kataoka H. Current developments and future trends in solid-phase microextraction techniques for pharmaceutical and biomedical analyses // Anal. Sci. – 2011. –Vol.27(9). – P. 893–90.
46. Woolfenden E. Sorbent-based sampling methods for volatile and semi-volatile organic compounds in air. Part 1: sorbent-based air monitoring options // J. Chromatogr. A. – 2010. –Vol. 1217(16). –P. 2674–2684.
47. Woolfenden E. Sorbent-based sampling methods for volatile and semi-volatile organic compounds in air. Part 2: Sorbent selection and other aspects of optimizing air monitoring methods// J. Chromatogr. A. – 2010. –Vol. 1217(16).-P.2685–2694.
48. Turner C. Techniques and issues in breath and clinical sample headspace analysis for disease diagnosis // Bioanalysis. – 2016.- Vol. 8(7).-P.677–690.