Лабораторная диагностика хеликобактериоза: исследование антител класса Ig G к антигену H. pylori в сыворотке крови пациентов различных возрастных групп

Введение. Хеликобактериоз является наиболее распространенной хронической бактериальной инфекцией человека и основной причиной развития хронической гастродуоденальной патологии (ХГДП) у пациентов различных возрастных групп [3, 5, 7, 8, 9, 11]. Наличие Н. pylori считается важнейшим этиопатогенетическим фактором развития хронического гастрита, ассоциированного с Н. pylori, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, гастродуоденита, а также железодефицитной анемии и тромбоцитопенической пурпуры [1, 3, 5, 7, 8, 9, 11, 12]. Исследователями многих стран показана взаимосвязь степени инфицирования населения от общего экономического развития страны, уровня жизни и образования, а также санитарно-гигиенических условий проживания [7]. Существует два варианта распространенности H. pylori. Согласно первому, характерному в основном для развивающихся стран (Нигерия, Чили, Бразилия и др.), H. pylori выявляется с высокой частотой уже в детском возрасте (до 90%), а к 30-ти годам инфицировано почти все население. В развитых странах Западной Европы, в США и Японии идет постепенное нарастание инфицированности с возрастом человека: 5-15 % у детей и 20-65% у взрослых [6, 7, 10].

Установлено, что в различных регионах России H. pylori выявляется у 73-91% взрослых [10]. Результаты эпидемиологических исследований распространенности HP-инфекции среди детей и подростков в Сибири говорят о том, что заражение Н. pylori начинается в раннем детском возрасте, достигая 33,3% к 10 годам и 56,3% - к 17-летнему возрасту. По данным других авторов, в Санкт-Петербурге выявлено 48% инфицированных в возрасте 15–19 лет, в Москве у детей, проживающих в районах высокой антропогенной загрязненности, распространенность Н. pylori составила 69% [9, 11]. Такая высокая степень обсемененности у детей может объясняться тем, что исследования проводились (в силу их дороговизны и сложности) в основном у детей с различными гастроэнтерологическими жалобами. При обследовании детей независимо от наличия диспепсии или болей в животе число инфицированных значительно меньше [10, 11]. Тем не менее частота выявления Н. pylori среди российских подростков существенно выше, чем в развитых странах. Например, доля серопозитивных детей в возрасте 10–15 лет составляет 6,6% в Новой Зеландии, 11% в Великобритании, 13,4% в Италии, 16,1% в Швеции и 17,9% в США. В развивающихся странах ситуация иная: в Албании инфицированы 96% подростков, в Индии - 84%, в Китае - 67%, в Чехии - 63%, в Мексике - 55,3% [9].

Несмотря на высокий процент инфицирования населения H. pylori, подавляющее большинство бактерионосителей (более 70%) не имеют клинических проявлений на момент диагностики, но представляет собой группу риска, в которой с течением времени развиваются различные HP- ассоциированные гастродуоденальные заболевания [6, 10, 11].

Результаты многочисленных исследований говорят о том, что инфекция Н. pylori является причиной наиболее тяжелых форм гастродуоденальной патологии у детей [9, 10, 11]. Наиболее часто Н. pylori обнаруживается при эрозивном (86%) и гипертрофическом (82%) гастритах, несколько реже при других формах гастрита: субатрофическом (60%), атрофическом (58%) и поверхностном (49%). При язвенной болезни двенадцатиперстной кишки Н. pylori выделяют чаще (91–100%), чем при язвенной болезни желудка (70–100%) [9].

Таким образом, инфекция Н. pylori имеет глобальное значение и широко распространена среди детской популяции во всем мире [5, 9].

В число первоочередной задачи системы здравоохранения входит проведение скрининговых эпидемиологических исследований с целью установления инфицированности Н. pylori населения разных возрастных и социальных групп в различных регионах Российской Федерации, частоты перехода инфицированности в манифестные формы, что позволит определить медико-социальное и экономическое значение хеликобактериоза для нашей страны [4].

Диагностика хеликобактер-ассоциированных заболеваний осуществляется с помощью многих лабораторно-клинических методов исследования, но ни один из них не может быть использован как полностью надежный [12]. Исследования, требующие активного сотрудничества ребенка, такие как УДТ, являются более трудными для выполнения у младенцев, детей ясельного возраста или физически неполноценных детей. С целью повышения точности диагностики H. pylori-инфекции следует использовать комбинацию различных методов. Оптимальное сочетание методов для достоверного выявления Н. pylori остается предметом обсуждения.

Наиболее распространенным серологическим методом диагностики инфекции H. pylori является метод иммуноферментного анализа, который позволяет обнаружить специфические антитела классов Ig А, IgM и чаще всего Ig G к антигенам H. pylori в сыворотке крови пациентов. Он наиболее информативен и незаменим для выявления инфицирования больших групп населения при проведении эпидемиологических обследований или в случае установленной болезни для первичной диагностики инфекции H. pylori, так как при высокой чувствительности и специфичности является минимально инвазивным и коммерчески доступным тестом [2, 5, 6, 12].

Но иммуноферментный анализ не может использоваться самостоятельно для выполнения диагностики H. pylori - инфекции или контролировать успех терапии, что обусловлено длительной циркуляцией специфических антител даже после полной ликвидации инфекционного процесса в организме. У детей его ценность ограничена также из-за возрастных особенностей и слабости иммунного ответа [12].

Чувствительность большинства исследований значительно ниже при использовании у детей, чем при использовании у взрослых в одном географическом регионе. Использование пороговых значений, полученных в ходе проверки исследований у взрослых, приводит к неспособности обнаружить большую часть инфицированных детей, особенно детей в возрасте до 6–8 лет. A. M. R. Oliveira и соавт. обнаружили низкую чувствительность у 44% детей в возрасте 2–6 лет. Чувствительность увеличивалась до 77% у детей в возрасте 7–11 лет и до 93% у подростков, что сопоставимо с результатами у взрослых [12].

Основной вопрос для всех исследований, проведенных у детей, - зависит ли точность примененного метода от возраста ребенка. Необходимо учитывать данные в различных возрастных группах: младенцы, малыши, дошкольный и школьный возраст, подростки. Большинство подтвержденных исследований у детей проводились только на нескольких H. pylori - инфицированных детях и у детей ясельного возраста. Таким образом, информация в отношении возрастной чувствительности для выявления антител класса Ig G к H. pylori ограничена [12].  

Цель исследования. Оценка частоты инфицирования Helicobacter pylori детей различных возрастных групп и взрослых при различных вариантах ХГДП для определения зависимости между возрастом пациента и инфицированием на основании выявления уровня антител Ig G к антигенам H. pylori в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа.

Материалы и методы. Исследования выполнены на базе клинико-диагностической лаборатории ОГБУЗ «Городская детская больница г. Белгорода» на иммуноферментном анализаторе ««Bio - Rad» методом твердофазного иммуноферментного анализа в сыворотке крови. В работе представлены результаты определения уровня антител класса Ig G к H. pylori в 405 образцах сыворотки крови. Основную массу наблюдений составили 362 пациента с обострением H. pylori-ассоциированных заболеваний, находившиеся на излечении в гастроэнтерологическом отделении городской детской больницы г. Белгорода в 2015 г. (табл. 1). В отдельную группу вошли 43 взрослых пациента с наличием клинико- морфологических признаков ХГДП. Критерием включения для участия в исследовании являлось добровольное согласие пациентов или их родителей.

Таблица 1.

Распределение пациентов по нозологическим группам (n = 382)(n = 3)

Наиболее частой нозологической формой явился гастродуоденит – 54,7% (n=198). Диагноз хронический гастрит был установлен у 21% пациентов (n=76), неинфекционный гастроэнтерит и колит у 16,3% (n=59), болезнь желудка и 12-перстной кишки у 4,4% (n=16), диспепсия у 2,8% (n=10) и язва 12-ти перстной кишки у 0,8% (n=3) пациентов.

Для решения поставленной задачи все дети были распределены на 6 групп, различающихся по возрасту. В I группу вошли 7 детей в возрасте до 3-х лет, во II группу – 87 в возрасте 3 – 6 лет, в III – 58 в возрасте 7-9 лет, в IV – 86 в возрасте 10 -12 лет, в V - 81 в возрасте 13 – 15 лет, в VI – 43 в возрасте 16 – 18 лет. Отдельную группу составили 43 взрослых пациента.

Серологические исследования на антитела класса Ig G к Helicobacter pylori проводили в сыворотке крови, полученной путем пункции локтевой вены. Для взятия крови использовались стерильные одноразовые вакуумные пробирки с активатором свертывания. Образцы сыворотки исследовали на иммуноферментном анализаторе «Bio - Rad» (Великобритания, США, Дания) качественным методом с использованием диагностического набора реактивов «Helicobacter pylori Ig G - ИФА» производства ООО «Хема» (г. Москва).

Критерии оценки серопозитивности и серонегативности исследуемых образцов сыворотки указаны в табл. 2. Индекс позитивности (ИП, %) Ig G антител к антигенам H. pylori в исследуемых образцах рассчитывали по формуле ИП = ОП образца / Cut off.

Образец рассматривали как качественно позитивный на наличие специфических Ig G антител, если отношение между средним значением образца и Cut off > 1,1; отрицательным, если отношение < 0,9; неопределенным, если ИП образца ≥ 0.9 и ≤ 1,1. По количественному критерию результат считали положительным при показателе оптической плотности > 0,6 оптических единиц (ОЕ), отрицательным – не выше 0,15 ОЕ во всех лунках. В случае получения неопределенных результатов образцы считали отрицательными.

Интерпретация результатов

Таблица 3.

Результаты исследования антител класса Ig G к H. pylori в сыворотке крови пациентов различных возрастных групп