Влияние экстракта листьев персика на продукцию цитокинов иммунокомпетентными клетками в опытах in vitro

АННОТАЦИЯ

Исследовано влияние экстракта листьев персика (ЭЛП) на цитокинопродуктивную функцию иммунокомпетентных клеток миндалин (ИККМ), полученных после аденотомии у детей в соответствии с методическими рекомендациями [6]. Культивирование клеток проводили с использованием среды RPMI 1840 с добавками (глютамин 290 мкг/мл и глютамицин 40 мкг/мл). К культуре клеток (2 млн клеток в 1 мл среды) добавляли ЭЛП в виде раствора. Было проведено 2 серии опытов. В первой серии изучали влияние ЭЛП в количестве 10 мкг на пробу, во второй серии – 100 мкг на пробу. В контроле использовали аналогичные концентрации глюкозы. Через сутки культивирования при температуре 37⁰ С пробы центрифугировали и в надосадочной части иммуноферментным методом, используя анализатор Lab Line (Австрия), определяли концентрации интерлейкина-1β (ИЛ-1), интерферона-γ (ИФН-γ), интерлейкина-4 (ИЛ-4) и интерлейкина-10 (ИЛ-10). Проведенные исследования показали, что ЭЛП в дозе 10 мкг статистически достоверно в 2,7 раза снижал продукцию ИЛ-1 в культуральной жидкости ИККМ. В дозе 100 мкг статистически достоверного снижения концентрации ИЛ-1 не установлено, хотя во всех опытах отмечалась тенденция к снижению концентрации этого цитокина. В обеих изучаемых дозах ЭЛП не влиял на содержание ИЛ-4 и ИЛ-10, не изменял секрецию ИФН-γ. Способность ЭЛП снижать продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-1, не изменяя образования противовоспалительных цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10, можно рассматривать как один из механизмов его противовоспалительного и иммуномодулирующего действия. В виду того, что ЭЛП не угнетает продукцию ИФН-γ, обладающего противовирусной активностью, его можно рассматривать как дополнительный компонент в комплексных схемах лечения воспалительных заболеваний с хронической формой течения, в т.ч. на фоне вирусных инфекций.

ABSTRACT

The effect of the peach leaves extract (PLE) on cytokines production of tonsils immune cells (TIC) of children received after adenotomy was investigated in accordance with the methodological recommendations [6]. Culturing of cells was carried out using RPMI 1840 medium with additives (glutamine, 290 mcg/ml and glutamicyne 40 mcg/ml). The solution of PLE was added to cells culture (2 million cells in 1 ml medium). 2 series of experiments were conducted. In the first series the effect of PLE in the quantity 10 mcg per sample was examined. In the second series the effect of PLE in the quantity 100 mcg per sample was examined. In control similar concentrations of glucose were used. After the cultivation during the day at 37⁰ С samples were centrifuged and in the supernatant portion the concentrations of interleukin-1β (IL-1), interferon-γ (IFN-γ), interleukin-4 (IL-4), interleukin-10 (IL-10) were determined with immunoenzyme method using a Lab Line analyzer (Austria). Conducted researches demonstrated that PLE in the quantity 10 mcg statistically significant by 2,7 times decreased production of IL-1 in culture liquid TIC. In the dose 100 mcg statistically significant decrease in the concentration of IL-1 was not established, although in all the experiments was a trend toward decrease in the concentration of this cytokine. At both doses PLE did not affect the content of IL-4, IL-10 and IFN-γ. The ability of PLE reduces concentration of proinflammatory cytokine IL-1 and does not change concentration antiinflammatory cytokines IL-4 and IL-10 is one of the mechanisms of its anti-inflammatory and immunomodulatory effects. In view of the fact that the PLE does not inhibit the production of IFN-γ, having antiviral activity, it can be considered as an additional component in integrated circuits for treating inflammatory diseases with a chronic form, including viral infections.

Результаты и обсуждение. Данные исследований приведены в таблице.

Проведенные исследования показали, что ЭЛП в дозе 10 мкг в опытах in vitro статистически достоверно в 2,7 раза снижал продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-1 в культуральной жидкости иммунокомпетентных клеток небных миндалин. Под влиянием ЭЛП в дозе 100 мкг статистически достоверного снижения концентрации ИЛ-1 не наблюдалось, хотя во всех опытах отмечалась тенденция к снижению этого цитокина. В обеих изучаемых дозах ЭЛП не влиял на содержание противовоспалительных цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10, а также не изменял секрецию ИФН-γ, обладающего противовирусной активностью.

ИЛ-1 является основным провоспалительным цитокином, выполняющим ключевую роль в развитии и регуляции неспецифической защиты и специфического иммунитета. Основные продуценты ИЛ-1 – макрофаги и моноциты. ИЛ-1 активирует нейтрофилы, Т- и В-лимфоциты, усиливает процесс экссудации, стимулирует синтез белков острой фазы, провоспалительных цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-6 и др.), молекул адгезии, факторов роста, прокоагулянтов, образование простагландинов, хемотаксис лейкоцитов, стимулирует фагоцитоз, гемопоэз, повышает проницаемость сосудистой стенки, усиливает цитотоксическую и антибактериальную активность иммунокомпетентных клеток. Количество ИЛ-1 должно быть достаточным для купирования инфекционно-воспалительного процесса, но не избыточным. Высокий уровень ИЛ-1 непосредственно после воздействия повреждающего фактора необходим для формирования адекватного ответа, однако в дальнейшем его продукция должна снижаться. В противном случае воспалительная реакция будет протекать со склонностью к затяжному хроническому течению и высокой активностью [4].

В связи с выше изложенным, снижение продукции провоспалительного цитокина ИЛ-1 в нашем эксперименте можно рассматривать как один из механизмов противовоспалительной и иммуномодулирующей активности ЭЛП. В регуляции воспаления принимают участие противовоспалительные цитокины ИЛ-4 и ИЛ-10, обладающие иммуномодулирующей активностью. Являясь функциональными антагонистами, они осуществляют контроль за эффектами провоспалительных цитокинов – способны ингибировать их продукцию, угнетать синтез рецепторных антагонистов интерлейкинов, сдвигать иммунный ответ в сторону образования антител [1, 2, 14]. Важно отметить, что ЭЛП, не изменял содержание противовоспалительных цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10 в культуре клеток небных миндалин и действовал как их агонист, понижая продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-1. Кроме того, ЭЛП не изменял секрецию ИФН-γ, обладающего противовирусной активностью за счет блокирования транскрипции, что нарушает последовательность нуклеотидов в молекуле РНК вирусов и их репликацию. Кроме этого ИФН-γ подавляет пролиферацию клеток, что блокирует распространение вируса, усиливает функции натуральных киллерных (НК) клеток, лизирующих вирус-инфицированные клетки, стимулирует образование Т-лимфоцитами специфических антител, т.е. кроме прямого антивирусного действия, активирует механизмы как врожденного (НК клетки), так и приобретенного (Т-лимфоциты) иммунитета [11, 13].

Выводы.

1. Способность экстракта листьев персика снижать продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-1, не изменяя образования противовоспалительных цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10, можно рассматривать как один из механизмов его противовоспалительного и иммуномодулирующего действия.
2. В виду того, что экстракт листьев персика не угнетает продукцию ИФН-γ, его можно рассматривать как дополнительный компонент в комплексных схемах лечения воспалительных заболеваний с хронической формой течения, в т.ч. на фоне вирусных инфекций.