ВАЛИДАЦИИ МЕТОДИКИ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА «ЦЕРАКСИДОЛ» РАСТВОРА ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ

АННОТАЦИЯ

В статье приводится обзор литературных данных, о проведение валидации разработанной методики качественного и количественного анализа для инъекционного лекарственного препарата «Цераксидол» методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием этилметилгидроксипиридина сукцинат в качестве стандартного образца. Результаты исследования свидетельствуют о методики подтверждения результатами определения валидационных характеристик, как специфичность (Specificity), правильность (Accuracy).

ABSTRACT

The article provides a review of the literature data on the validation of the developed method of qualitative and quantitative analysis for the injectable drug "Ceraxidol" by high performance liquid chromatography using ethyl methylhydroxypyridine succinate as a standard sample., correctness (Accuracy).

Ключевые слова: валидация, высокоэффективный жидкостной хроматограф, этилметилгидроксипиридина сукцинат, стандартный образец, испытуемый образец, модельный раствор, плацебо, специфичность, правильность.

Keywords: validation, high performance liquid chromatograph, ethylmethylhydroxypyridine succinate, standard sample, test sample, model solution, placebo, specificity, correctness.

Актуальность темы. В современных условиях к лекарственным средствам предъявляется ряд требований, определяющих их целесообразность и возможность эффективного использования в медицинской практике. Основными требованиями к лекарственным препаратам Всемирная Организация Здравоохранения определила эффективность, безопасность и доступность для населения [1;2].

Руководящий принцип GMP состоит в том, что качество закладывается в процесс производства продукции, а не только проходит проверку в готовом продукте. Поэтому, создаются гарантии того, что препарат не только соответствует конечным техническим условиям, но и того, что он изготавливается в соответствии с тем же порядком действий и при тех же условиях всякий раз, когда осуществляется его выпуск. Существует немало способов контроля данного процесса: валидация составляет именно тот раздел правил GMP, благодаря которому обеспечивается устойчивость технологических систем, оборудования и процессов, и условия проведения испытаний, что позволяет выпускать неизменно качественную продукцию. Другими словами, проведенная надлежащим образом валидация фармацевтического производства способствует стабильному выпуску качественной продукции [5].

Этилметилгидроксипиридина сукцинат является эффективным антиоксидантным средством и применяется в виде инъекционных растворах. В настоящее время на основе данного соединения на фармацевтическом предприятии OOO «Mediofarm» выпускается препарат «Цераксидол» раствор для инъекции 50 мг/мл. Контроль качества данного лекарственного средства, содержащего это соединение, является актуальной задачей.

Целью данного исследования является изучение валидационных характеристик подлинности и количественного определения активного фармацевтического ингредиента – этилметилгидроксипиридина сукцинат инъекционного раствора «Цераксидол» 50 мг/мл. для экспериментального доказательства пригодности разработанной методики.

Материалы и методы исследования. В качестве объекта выбран инъекционный раствор «Цераксидол». Количественное определение действующего вещества – этилметилгидроксипиридина сукцинат в жидкой дозированной лекарственной форме проведено по разработанной методике использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Оценка валидационных характеристик методик испытаний проводилась по показателям: специфичность (Specificity), правильность (Accuracy) [2; 6].

Экспериментальная часть

Все валидационные характеристики методики определения подлинности и количественного содержания этилметилгидроксипиридина сукцинат устанавливали в соответствии с требованиями рекомендаций. В ходе проведения исследований использовали высокоэффективный жидкостный хроматограф “Agilent 1260” 3D LC System фирмы Инфинити (Германия), мерная посуда класса А, весы аналитические АS-220/Х серия №В635963283 фирма «Ohaus» (Германия).

Исследования проводили с использованием реактивов (тетраметиламмония гидроксида пентагидрата, ацетонитрил, кислота фосфорная) по качеству отвечающих требованиям ГФ.

В качестве стандартного образца была использована субстанция, % содержание которой–99,9%(Индия).

Исследования проводили на жидкостном хроматографе с УФ детектором в колонках (250х4,6 мм) Zorbax Eclipce Plus C18, заполненных октадецилсиликагелем (Hypersil), размером частиц 5,0 мкм [2]. Подвижная фаза: взвешивают 6,42 г тетраметиламмония гидроксида пентагидрата и переносят в мерную колбу объёмом 2000 мл. Растворяют с помощью 1500 мл воды очищенной, добавляют 500 мл ацетонитрила R. Корректируют pH до6,5+0,05ортофосфорной кислотой. Фильтруют и дегазируют.

Хроматографирование ведётся в следующих оптимальных условиях: скорость подвижной фазы – 1 мл/мин; объем инжекции – 20 мкл; температура термостата колонки – 20ºС; длина волны детектирования 220 нм. Условия пригодности хроматографической системы: эффективность хроматографической колонки по пику этилметилгидроксипиридина сукцинат – не менее 1000 теоретических тарелок; коэффициент симметрии пика этилметилгидроксипиридина сукцинат – не более2,0, относительное стандартное отклонение площади пика этилметилгидроксипиридина сукцинат, рассчитанное по 6 последовательным хроматограммам–не более 2,0%.

Приготовление растворов стандартного образца (СО), испытуемого образца (ИО), модельных растворов (МР) и «плацебо».

Приготовление раствора СО. Около 25,0 мг (точная навеска) рабочего стандартного образца этилметилгидроксипиридина сукцината помещали в мерную колбу вместимостью 100,0 мл, растворяют в воде очищенной на ультразвуковой бане. Доводят до метки водой очищенной. 5,0 мл полученногорастворапомещаютвмернуюколбуобъемом50мл.Доводятдометки водой очищенной. После фильтрации через ПТФЭ фильтр с размеромпор0,45мкм,растворпереносятввиалудля ВЭЖХ.

Раствор ИО. Навеску образца, эквивалентную 50,0 мг этилметилгидроксипиридина сукцината, помещают в мерную колбу объемом 200 мл. Растворяют в воде очищенной на ультразвуковой бане. Доводят до метки водой очищенной. 5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу объемом 50 мл. Доводят до метки водой очищенной. После фильтрации через ПТФЭ фильтр с размером пор 0,45мкм, раствор переносят в виалу для ВЭЖХ.

МР (№ 1–5), состоящие из субстанции этилметилгидроксипиридина сукцината, содержащие соответственно 80, 90, 100, 110 и 120 % определяемого компонента (аналитическая область определения), по отношению к их содержанию в «Цераксидол» раствор для инъекций 50 мг/мл», а также «плацебо», не содержащий субстанцию этилметилгидроксипиридина сукцинат.

Попеременно хроматографировали раствор СО и МР, получая число параллельных хроматограмм не меньше, чем при проверке пригодности хроматографиической системы [2]. Концентрации этилметилгидроксипиридина сукцинат в мг рассчитывали по следующей формуле:

где:

S₁ – площадь пика этилметилгидроксипиридина сукцината на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ – площадь пика этилметилгидроксипиридина сукцината на хроматограмме раствора РСО;

а₀ – навеска стандартного образца этилметилгидроксипиридина сукцината, взятая для приготовления стандартного раствора, в мг;

Р – содержание основного вещества в РСО этилметилгидроксипиридина сукцината, в %.

Содержание этилметилгидроксипиридина сукцината в 1 мл препарата должно быть от 45,0 мг до 55,0 мг.

Расчет параметров линейной зависимости полученных результатов проводили методом наименьших квадратов в системе нормализованных координат, а также значений правильности и сходимости [2].

Результаты и их обсуждение

Для растворов ИО и СО вычисляют среднее значение времени удерживания пика этилметилгидроксипиридина сукцината, соответственно Sср ИО и Sср СО (мин),  относительную систематическую ошибку (d, %) действительного значения (модельного препарата) от истинного значения (СО) рассчитывают по формуле:

Результаты экспериментов представлены в таблице 1.

Таблицa 1.

Результаты определения подлинности этилметилгидроксипиридина сукцината в растворе «Цераксидол» параметром специфичности

Установление специфичности (Specificity)методики проведено путем определения подлинности этилметилгидроксипиридина сукцината в растворе «Цераксидол» для инъекций 50 мг/мл, исходного раствора СО этилметилгидроксипиридина сукцината (в трёх повторах) и сравнения их с раствором «плацебо», отклонение ИО от полученных результатов СО составило 0,042% , что меньше 0,08% (ошибки определения).

Критерием оценки при определении подлинность был сопоставлен при времени удерживания основного пика этилметилгидроксипиридина сукцината на хроматограмме испытуемого и её СО раствора. Время удерживания на обоих хроматограммах должна совпадать.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1 и на рисунках 1–2.

Рисунок 1. Типичная хроматограмма стандартного образца этилметилгидроксипиридина сукцината

Рисунок 2. Хроматограмма испытуемого препарата «Цераксидол»

Испытание правильности (Accuracy) методики проводили на модельных растворах. Для каждой концентрации были приготовлены по три образца. Вычисляли содержание этилметилгидроксипиридина сукцината в приготовленных МР. Правильность методики характеризуется близостью полученных средних результатов испытаний к принятому эталонному значению определяемой величины.

Критерий приемлемости - среднее значение степени извлечения (recovery) должны быть от 98,0% до 102,0%.

Степень извлечения (Recovery) рассчитывали по следующей формуле:

где:m_теор – теоретическое количество заявленного действующего вещества;m_обн – обнаруженное количество действующего вещества. Результаты проведенных исследований приведены в таблице 2.

Таблица 2.

Результаты определения по установлению правильности методики

Валидируемая методика признана правильной, поскольку определяемые экспериментально значения лежат внутри доверительных интервалов, соответствующих средним результатам анализа. Рассчитанные значения t_выч. оказались меньше табличного (t_табл = 2,36 при Р = 95 %, f = 8), что позволяет с вероятностью 95 % сделать вывод об отсутствии значимой систематической ошибки.

Выводы

Проведена валидация разработанной методики количественного определения этилметилгидроксипиридина сукцината в инъекционном растворе методом ВЭЖХ. Методика подтверждена результатами определения таких валидационных характеристик, как специфичность (Specificity) и правильность (Accuracy). Разработанная методика может быть рекомендована для включения в нормативно-техническую документацию для контроля качества разрабатываемого лекарственного средства.

Список литературы:

1. Юнусходжаева Н.А,Убайдуллаев К.А. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов жидкого экстракта “Гемостат” /Фармацевтический журнал №1,-2017 -С. 29-33Effect of tranexamic acid on surgical bleeding: systematic review and cumulative meta-analysis / K. Ker[et al.]. – 2012 May 17. – N 344. – P. e3054.
2. Сарварова Д.М., Юнусходжаева Н.А. «Валидация методики контроля качества раствора для инъекций «Танергин». Фармацевтический вестник Узбекистана. Научно - практический фармацевтический журнал. 4/2020.стр 34 с.
3. Chernyshev A.I., Kuzmin S.V., Zhestkov V.P., Smir: nov L.D.// Pharm. Chem. -1996. -P. 63.
4.  British Pharmacopoeia -2009. Monographs: Medicinal and Pharmaceutical substances. Tranexamic Acid. -P. 1222.
5. Береговых В.В. (ред.) Валидация аналитических методик для производителей лекарств М.: Литтерра, -2008. — 132 c.
6. Эрмер Йоахим, Миллер Джон. Валидация методик в фармацевтическом анализе. Примеры наилучшей практики Пер. с англ. — М.: Группа компаний Виалек, -2013. - 512 с
7. Быковский С.Н. (Ред.) Руководство по инструментальным методам исследований при разработке и экспертизе качества лекарственных препаратов М.: Изд-во «Перо», 2014. - 656 с.: ил.
8. Юргеля Н.В., Младенцева А.Л.,Бурдейна А.В., Гетьмана М.А., Малина А.А., Косенко В.В. Руководство для предприятий фармацевтической промышленности (методические рекомендации)часть москва 2007.-18-33с.