ПРОВЕДЕНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА В ВИДЕ МАЗЕЙ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ МЕСТНОГО СЫРЬЯ

АННОТАЦИЯ

Сотрудники Института Химии растительных веществ (ИХРВ) АН РУз, выделили сухой экстракт состоящий из флавоноидов с верхней части трехраздельной череды растущий в местной среде. Предложен новый состав и технология мази полученных из сухого экстракта череды и сухого экстракта корня солодки. В данной статье представлены результаты исследования основных количественных показателей, мазей для лечения кожной аллергии, полученных из местного сырья. Изучена количественное содержание рутина и глицирризиновой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ABSTRACT

Employees of the Institute of Plant Substances Chemistry (IHRA) of the Academy of Sciences of Uzbekistan, isolated a dry extract consisting of flavonoids from the top of the tripartite sequence growing in a local environment. A new composition and technology of the ointment obtained from the dry extract of the string and the dry extract of licorice root is proposed. This article presents the results of a study of the main quantitative indicators, ointments for the treatment of skin allergies, obtained from local raw materials. The quantitative content of rutin and glycyrrhizic acid was studied by high-performance liquid chromatography.

Ключевые слова: сухой экстракт череды, глицирризиновая кислота, высокоэффективная жидкостная хроматография, технология, сухой экстракт череды, мягкие лекарственные формы.

Keywords: dry extract of herba bidentis, glycyrrhizic acid, high performance liquid chromatography, technology, soft dosage forms.

В последние годы во всех странах мира наблюдается рост числа аллергических заболеваний, причем среди населения в развитых странах их удельный вес составляет 35%, а в экологически неблагоприятных регионах - до 40-50% случаев. Проблемы аллергии и других заболеваний тесно связаны с иммунологическими нарушениями в организме человека. Интенсивные исследования в последние десятилетия в области теоретической и клинической аллергологии и иммунологии способствовали выявлению широкого круга заболеваний, обусловленных дисфункцией различных звеньев иммунитета и требующих иммунокорригирующей терапии. Поиск средств и способов регуляции иммунологической реактивности организма человека стал одним из приоритетных направлений развития современной медицины [1].

В связи с этим актуальным является усовершенствование подходов к лечению АЗ, создание новых эффективных противоаллергических средств [2].

В настоящее время для лечения аллергических заболеваний широко применяются синтетические антигистаминные препараты I, II и III поколений. Нельзя отрицать того, что во время применения данных лекарств одновременно с эффективным воздействием на аллергию, они ещё оказывают и побочные негативные проявления.  Поэтому создание нового, безвредного, недорогого и эффективного препарата против аллергии используя природные возможности не вызывает сомнения в решении данной проблемы.

Но до настоящего времени для лечения кожной аллергии не разработаны и не внедрены в практику лекарственные средства из местного растительного сырья в форме мазей, разработанных на основе суммы флавоноидов из череды и экстракта корня солодки.

Изучение влияния на кожную аллергию новых лекарственных средств в форме мазей, разработанных на основе суммы флавоноидов и экстракта корня солодки, изготовленных в составе нового вспомогательного вещества из местного сырья, и проведение всех доклинических исследований и позволит в будущем расширить производство и внедрить в практику, способствует решению данной проблемы.

Разработано технология производства новых лекарственных препаратов в форме мазей, на основе из сухого экстракта череды и солодки [3,4].

Экспериментальная часть. Учитывая, что хроматографические методы наиболее удобны для анализа мнокомпонентных препаратов, было принято решение для одновременного анализа содержания глицирризиновой кислоты и рутина использовать метод ВЭЖХ [5].

В результате проведенных экспериментальных исследований и модификации известных хроматографических методов анализа были выбраны, как наиболее оптимальными следующие условия:

Метод обращено фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Количественное определение. 1.Глицирризиновая кислота. 1,0 г препарата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки подвижной фазой и перемешивают. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Вводят по 20 мкл растворов испытуемого и рабочего стандартного образцов в инжектор жидкостного хроматографа типа Agilent 1100 series с УФ-детектором и изократным насосом и получают не менее З хроматограмм для каждого из растворов, в следующих условиях:

-хроматографическая колонка с размером 3,0 мм х 15 см, заполненная сорбентом Zorbax Eclipse XDB С- 18, с размером частиц 3,5 мкм;

- подвижная фаза: ацетонитрил вода фосфатная кислота 50:50:1

- скорость потока подвижной фазы — 1,5 мл/мин;

- температура колонки — комнатная;

- детектирование при длине волны 254 нм.

Содержание глицирризиновой кислоты (Х) в 1,0 г препарата, в мг, рассчитывают по формуле:

где:

S_исп -площадь основного пика на хроматограмме раствора испытуемого образца;

S_стд -площадь основного пика на хроматограмме раствора РСО моноаммонийной соли глицирризиновой кислоты;

а _стд- масса навески РСО моноаммонийной соли глицирризиновой кислоты, мг;

822,94 — молекулярная масса глицирризиновой кислоты;

839,97 — молекулярная масса моноаммонийной соли глицирризиновой кислоты;

Р - содержание моноаммонийной соли глицирризиновой кислоты в РСО,%.

Примечание. Приготовление РСО моноаммонийной соли глицирризиновой кислоты. Около 10 мг (точная навеска) рабочего стандартного образца моноаммонийной соли глицирризиновой кислоты (Бр.Ф, Евр.Ф) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в подвижной фазе, доводят объем раствора до метки и перемешивают. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Рисунок 1. Хроматограммы испытуемых и стандартных образцов глицирризиновой кислоты

Таблица 1.

Метрологические характеристики методики количественного определения глицерризиновой кислоты

2. Сумма флаваноидов. (Рутин). 1,0 г препарата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки метанолом, перемешивают и нагревают. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Вводят по 20 мкл растворов испытуемого и рабочего стандартного образцов в инжектор жидкостного хроматографа типа Agilent 1100 series с УФ-детектором и изократным насосом и получают не менее З хроматограмм для каждого из растворов, в следующих условиях:

-хроматографическая колонка с размером 3,0 мм х 15 см, заполненная сорбентом Zorbax Eclipse XDB С- 18, с размером частиц 3,5 мкм;

- подвижная фаза: метанол, вода, фосфатная кислота 70:30:1

- скорость потока подвижной фазы — 1,0 мл/мин;

- температура колонки — 40⁰С;

- детектирование при длине волны 360 нм.

Содержание рутина (Х) в 1 мг препарата, рассчитывают по формуле:

где:

S_исп -площадь основного пика на хроматограмме раствора испытуемого образца;

S_стд -площадь основного пика на хроматограмме раствора РСО рутина;

а _стд    - масса навески РСО моноаммонийной соли глицирризиновой кислоты, мг;

Р - содержание рутина в РСО, %.

Примечание. Приготовление РСО рутина. Около 10 мг (точная навеска) рабочего стандартного образца рутина (Бр.Ф, Евр.Ф) помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в метаноле, доводят объем раствора до метки и перемешивают. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Рисунок 2. Хроматограммы истытуемых и стандартных образцов рутина

Таблица 2.

Метрологические характеристики методики количественного определения рутина

Результаты исследования и обсуждение. Количественное определение глицирризиновой кислоты и рутина в виде мазей проведенные методом ВЭЖХ составили 1,12% и 0,839%, что также соответствует требованиям НТД.

Выводы. Полученные результатов валидации предлагаемых методов количественного анализа действующих веществ, показали, что хроматографический метод анализа глицирризиновой кислоты и рутина позволяют достоверно оценивать и стандартизовать качество препарата. Методы рекомендованы для включения в проект фармакопейной статьи.

Список литературы:

1. Хобракова В.Б., Николаев С.М. Растительные иммуномодуляторы в коррекции иммунодефицитов //Российский аллергологический журнал. - 2008. - № 1. - С. 324-325.
2. Куцык Р. В., Зузук Б. М., Куровец Л. М. Лекарственные растения и перспективы антиаллергической терапии: (обзор литературы).  //Провизор. -  1998. - №8. - С. 45-48.
3. Персев, И.М., Котенко А.М., Чуешов О.В. и др. Фармацевтические и биологические аспекты мазей (монография). НФаУ. 2003. С. 285.
4. Хатамов Х.М., Суяров А.А., Фозилжонова М.Ш. Влияние новой комбинированной мази при контактном аллергическом дерматите кожи у морских свинок // «Новый День в Медицине». Научный реферативный журнал, 2020.№2(30/2). С.180-184.
5. Эпштейн Н.А Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе // Хим.-фарм. Журнал, 2004. №4. С. 40 - 56.
6. № IAP 2020 0119. Мазь для лечения аллергических заболеваний кожи. Патент на изобретение.