ЭТАПЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ ПРИ ВЫРАЩИВАНИИ РАСТЕНИЙ АНАНАСА IN VETRO

АННОТАЦИЯ

В статье полностью освещен этап стерилизации при размножении растения ананас in vitro. Плодовые почки ананаса выделили и стерилизовали в растворах различной концентрации, определили оптимальный метод стерилизации.

ABSTRACT

In the article, the sterilization stage of in vitro propagation of the pineapple plant is fully covered. Pineapple fruit buds were isolated and sterilized in solutions of different concentrations, and an optimal sterilization method was determined.

Ключевые слова: Ананас, растение, фрукты, витамин, токсин, фермент, стерилизация, фитогормон, бикарбонат натрия, Мурасиге-Скуга, пробирки, автоклав, сушильный шкаф.

Keywords: Pineapple, plant, fruit, vitamin, toxin, enzyme, sterilization, phytohormone, sodium bicarbonate, Murasige-Skuga, test tubes, autoclave, drying cabinet.

Введение: Ананас — мягкотелое растение высотой и шириной около 1-2 метров. Благодаря расположению листьев растение имеет спиральную морфологию. Стебель представляет собой отчетливый центральный цилиндр, прямостоячий, шаровидный, длиной около 25-50 см, у основания 2-5 см, вверху 5-8 см, содержит узлы и междоузлия [1].

Цветок ананаса представляет собой соцветие, которое обычно развивается из верхушки. Меристема сохраняется до 15 дней в акропетальной последовательности. За время цветения образует от 50 до 200 отдельных цветков. Цветок спиралевидной формы, покрыт коронкой из около 150 коротких лепестки. Его называют «красным сердцем» из-за красного цвета на стадии цветения. Цветки содержат мужские и женские репродуктивные органы[2].

Отдельные цветки типичны для однодольных и трехчленные, с тремя лепестками и тычинками, шестью тычинками (около половины длины лепестков), двумя мутовками и одним пестиком, содержащим три семенные части [3].

Лепестки белые, основание их фиолетово-синее, язычковидной формы. Каждый цветок покрыт трихомами и окружен толстым обращенным к себе стеблем. Лепестки более или менее треугольной формы. Цветки собраны в узкую компактную трубку, доступ к которой доступен только насекомым или особым птицам.

Пыльцевая часть цветка двухслойная, содержит много пыльцевых зерен, клейких, шаровидных по форме, двусторонне-симметричных, с двумя отверстиями. (Бартоломью и др., 2003). Есть большие различия в размерах.

Анализ литературы. Плод ананаса представляет собой бессемянный синкарп многоугольной формы. Плоды могут составлять около 2-3 кг и более. Спелый плод имеет желтую кожуру и приятный запах. Цвет от светло-желтого до золотисто-желтого, сладкий и сочный. Семена образуются редко, они кажутся плоскими, изогнутыми с одной стороны и заостренными с другой. Они около 3-5 мм длиной и 1-2 мм шириной, покрыты твердой семенной кожурой. Плод обычно содержит пучок мелких листьев, которые можно использовать для вегетативного размножения [4]. В ананасе нет токсинов. Однако при употреблении в пищу в сыром виде и в больших количествах ананас может вызвать жжение на губах и во рту, а также вызвать стоматит. То есть вызывает воспаление слизистой оболочки рта, щек, десен, губ, языка и рта. Употребление слишком большого количества ананаса может вызвать желудочно-кишечные заболевания. Ананас не содержит вредных фитохимических веществ [5].

Стерилизация ламинарного бокса. Рабочая внутренняя поверхность ламинара протирается 70% спиртом. Затем в ламинар помещают спирт, спички, стакан с 96%-ным спиртом, стерилизуемую посуду, инструменты и флягу со стерилизованной водой. При разделении меристем на ламинарную пластинку также накладывают бинокулярную лупу. Перед операцией ламинарный бокс облучают бактерицидной ультрафиолетовой лампой в течение 2 часов. За два часа до работы внутреннюю поверхность ламината еще раз протирают 70%-ным спиртом.

Перед началом работы тщательно вымойте руки с мылом, протрите спиртом, наденьте стерильный халат, наденьте стерильную маску на рот.

Стерилизация контейнеров. Контейнеры стерилизуют в сушильных шкафах сухим жаром или в автоклаве влажным паром. Перед стерилизацией посуду следует тщательно вымыть и высушить. Для мытья посуды применяют различные моющие средства и хромовые кислоты (раствор бихромата калия в серной кислоте). Вымытую посуду ополаскивают в дистиллированной воде и сушат в сушильном шкафу. Перед стерилизацией горловины пробирок и колб закрывают ватными тампонами и оборачивают бумагой во избежание загрязнения из воздуха. Затем посуду помещают в сушильные шкафы и нагревают при температуре 1600С в течение 2 ч. Еще лучшей стерилизации можно добиться под давлением в автоклаве, поскольку микроорганизмы и их споры еще лучше погибают при нагревании влажным теплом. В автоклаве стерилизуют различные стаканы, чашки Петри, пипетки, колбы с дистиллированной водой. Контейнеры автоклавируют 25-30 минут при давлении 2 атмосферы, заворачивают в фольгу или упаковочную бумагу. При автоклавировании пипеток их оборачивают ватой и упаковывают отдельно.

Анализ и результаты. В наших экспериментах мы использовали плоды ананаса. Бутоны и листья плодов аккуратно удаляли ножом и стерилизовали. Для этого мы тщательно смешали части растения в смеси дитола и воды и замачивали их в холодной воде на два часа. После этого подготовленные кожуру и лист ананаса тщательно встряхивали в 30% растворе хлора в течение 5 минут, в 50% растворе 5 минут и в 70% растворе 5 минут. Промывали 70% раствором спирта в течение 1 минуты и 3 раза в дистиллированной стерилизованной воде. Хранение: Хранить при температуре 24°C при 16/8 света. В результате через 3 дня на растениях появилась плесень.  

Рисунок 1. Плодовые почки и листья ананаса сажают в пищу

На последнем этапе мы тщательно промывали кожуру и лист ананаса в 50% растворе хлора 3 раза по 5 минут, 3 раза по 5 минут в 30% растворе и 3 раза по 5 минут в 15% растворе. Промывали 70% раствором спирта в течение 1 минуты и 3 раза в дистиллированной стерилизованной воде и хранили в инкубационной камере при температуре 24°С и освещенности 16/8. В результате роста микроорганизмов в растении не наблюдалось (рис. 1).

Выводы. Хлор в 50% растворе, 30% растворе и 15% растворе оказался наиболее подходящим раствором на этапах стерилизации растений ананаса. Эти растворы не вредят растительным клеткам и полностью удаляют микроорганизмы. Эта информация согласуется с информацией, представленной в литературе.

Список литературы:

1. Botella, J.R., Fairbairn, D.J. (2005). Present and Futute Potential of Pineapple Biotechnology. Acta Horticulturae 666: 312-318.
2. Chan, Y.K. (2006). Hybridization and selection in Pineapple Improvement: The experience in Malaysia. Acta Horticulturae 702: 87-92.
3. Kuan, C.S., Yu, C.W., Lin., Hsu,H.T. (2005). Foliar application of aviglycine  reduces natural flowering in pineapple. HortSceince 40:123-126
4. Mateljan, G. (2007). The Worlds Healthiest foods. Mateljan, G (eds). United States, Seattle WA
5. Trusov, Y., Botella, J.R. (2006). Delayed flowering in pineapples caused by Co-Suppression of the ACACS2 Gene. Acta Horticulturae 702: 29-35.